時間：2022-07-18 03:55:50
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長管拖車是指在拖車上或集裝框架內(nèi)裝有幾只到十幾只大型無縫鋼瓶的高壓氣體運輸設備，通常用配管和閥門將氣瓶連接在一起，并配有安全裝置、壓力表和溫度計。由于這種設備具有高效靈活、安全可靠、使用維護方便等特點，因此，隨著氣體工業(yè)的發(fā)展被迅速推廣使用。1987年初，隨著國內(nèi)第一家合資氣體公司落戶深圳，長管拖車被引進中國，近年來國內(nèi)的氣體工業(yè)發(fā)展迅速，國外的氣體公司紛紛在國內(nèi)投資建廠；另一方面，國內(nèi)天然氣汽車及壓縮天然氣（簡稱CNG）母子站的發(fā)展需要將大量的天然氣運輸?shù)經(jīng)]有天然氣管網(wǎng)的地區(qū)或很難修建管網(wǎng)的市區(qū)。這都促進了CNG長管拖車在國內(nèi)的廣泛應用。但是，CNG長管拖車裝載的壓縮天然氣，工作壓力高，使用時需經(jīng)常來往于城市道路及建筑密集地帶，安全問題十分重要，而制造及裝置設置方面的安全問題，又是CNG長管拖車操作安全的首要保障。
一、CNG長管拖車的主要安全技術措施
1、控制氣瓶質(zhì)量：氣瓶作為長管拖車的主要承壓部件, 其質(zhì)量與長管拖車的安全性能密切相關。因此氣瓶內(nèi)外表面均經(jīng)過噴丸處理, 并用內(nèi)窺攝像系統(tǒng)逐只進行內(nèi)部全面檢查, 確保內(nèi)部質(zhì)量。氣瓶成形及水壓試驗后逐只進行磁粉檢測, 確保不得有任何裂紋狀缺陷存在。氣瓶的兩端螺紋均經(jīng)磁粉檢測, 確保連接螺紋質(zhì)量可靠。
2、設置爆破片裝置：氣瓶的兩端均設置爆破片裝置。爆破片裝置較安全閥體積小、重量輕, 但密封可靠, 其泄放面積較同體積的安全閥泄放面積要大得多。
3、設置壓力表：氣瓶充卸氣管路上設置壓力表一塊, 量程取1.5～3倍的工作壓力, 精度1.5級。壓力表采用防震型, 其前端設置壓力表閥, 便于更換拆卸。
4、設置溫度計：考慮到工作環(huán)境溫度及充氣時氣體溫度升高、卸氣時氣體溫度降低等因素影響，溫度計測量范圍應覆蓋最低和最高工作溫度，測量范圍應取-40～60 ℃。溫度計可采用雙金屬型，讀數(shù)方便，堅固耐用機械論文，且采用防護套管與介質(zhì)隔開，易于更換拆卸論文范文。
5、設置安全聯(lián)鎖裝置：裝卸氣過程中，即操作倉門打開狀態(tài)，嚴禁汽車啟動運行，否則會造成裝卸軟管等連接部位拉斷、氣體泄漏等嚴重事故。故在操作倉內(nèi)設置氣動安全聯(lián)鎖裝置, 靠汽車行走部分自帶氣包提供氣源, 操作狀態(tài)時使汽車處于制動狀態(tài)，無法啟動，裝卸氣完畢，操作倉門關閉后，制動狀態(tài)才予以解除，汽車可正常行駛。
6、設置導靜電裝置：長管拖車尾部設置導靜電接地帶，操作倉管路上設置導靜電片，可隨時導出運行時及充卸氣時積聚的靜電荷。導靜電拖地帶采用柔軟耐磨的導靜電橡膠拖帶，即能充分泄放靜電荷，又不至于放電太快而產(chǎn)生火花放電。
7、設置滅火裝置：長管拖車兩側(cè)各配一只5kg干粉滅火器，以備發(fā)生火災險情時急用。
8、控制管路泄漏點：操作倉內(nèi)裝卸氣匯總管及各分支管之間采取焊接結(jié)構(gòu)，且經(jīng)表面滲透檢測，盡量減少泄漏點。高壓閥門均經(jīng)復驗合格，驗證高、低壓狀態(tài)下的密封性。裝卸氣管及氣體排空管均用管夾或支撐予以固定以減輕車輛運行時對管路振動的影響。
二、CNG長管拖車安全使用
1. 長管拖車進入充裝區(qū)，應將其接地帶（靜電帶）提起，并帶上防火帽。
2. 充（卸）作業(yè)步驟：
2.1將長管拖車停放在裝（卸）站制定的安全作業(yè)地點，熄滅牽引車發(fā)動機，打開后操作倉門，掛好風鉤，對掛車實施駐車制動。
2.2將充裝（卸氣）站的靜電接地線與長管拖車操作倉的導靜電片連接。
2.3檢查各連接部位是否連接緊固，檢查各管件連接處是否泄漏。
2.4充氣
2.4.1首次充裝
a. 首次充裝包括新車的第一次充裝和檢修后的第一次充裝，因為這時鋼瓶內(nèi)充有一定壓力的氮氣，充裝前應將其放空。
b. 充裝前應檢查閥門是否處于關閉狀態(tài)，檢查是否含有氮氣余壓并用儀器檢測確然含氧量不大于3%。
c. 保持氣體管路主控球閥處于關閉狀態(tài)，依次開啟各瓶口球閥，然后緩慢開啟主控球閥，將鋼瓶內(nèi)封裝的氮氣放空，待壓力卸盡后立即關閉主控球閥。將站上充裝軟管與快速接頭進行連接，確保連接到位。
d. 置換軟管空氣，開啟充裝站的充氣閥，使天然氣進入軟管，壓力平衡后關閉，然后開啟放空閥將軟管內(nèi)天然氣放空，關閉放空閥。
e. 開啟主控球閥，然后緩慢開啟充裝站的充氣閥進行充氣作業(yè)。
f. 當達到充裝溫度對應的充裝壓力時（表1），關閉充裝站的充氣閥，關閉各瓶口球閥及主控球閥機械論文，開啟放空閥，將軟管內(nèi)的氣體排出，確認軟管內(nèi)無壓力后斷開快裝接頭的連接。
表1充裝溫度與充裝壓力對照表
公稱壓力MPa
充裝溫度℃
-10
10
20
30
40
50
60
20
充裝壓力MPa
15.2
16.8
18.4
20
21.5
（1）物質(zhì)資本和土地。資本常指在生產(chǎn)過程中涉及到的各種生產(chǎn)資料，包括生產(chǎn)場所、勞動工具等，對于農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展，農(nóng)業(yè)資本指為進行農(nóng)業(yè)生產(chǎn)所投入的各種生產(chǎn)資料的總和，包括用種量、農(nóng)藥和化肥等。顯然，農(nóng)藥化肥和其他各類農(nóng)資產(chǎn)品的使用對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)至關重要。作為一種特殊的物質(zhì)資本形式，土地在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中的作用尤為顯著。一般而言，隨著農(nóng)業(yè)機械化的發(fā)展和農(nóng)業(yè)基礎設施的改善，勞動力擁有的農(nóng)業(yè)機器設備越多，土地面積越廣闊，勞動生產(chǎn)率提高得越快。
（2）人力資本。人力資本對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長具有非常重要的作用。人力資本理論認為，勞動投入應當是“勞動力數(shù)量”與“勞動力素質(zhì)”的綜合反映。勞動力素質(zhì)往往與勞動力接受的教育程度和與職業(yè)相關的培訓程度有關。勞動的不斷積累會使得勞動本身產(chǎn)生遞增收益；勞動質(zhì)量的提高會使得勞動以外的因素如資本等產(chǎn)生遞增收益，提高生產(chǎn)效率，增加其他生產(chǎn)要素的邊際產(chǎn)出，同時會使得它們的單位成本下降。
（3）技術進步?？茖W技術是第一生產(chǎn)力，科技的發(fā)展對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長起著推動作用。技術進步從三個方面影響農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長：第一，技術進步有利于促進農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展從傳統(tǒng)的“粗放式”轉(zhuǎn)變?yōu)楝F(xiàn)代的“集約式”；第二，在市場競爭中，技術可以幫助企業(yè)實現(xiàn)集約化經(jīng)營，提高競爭力；第三，技術進步對經(jīng)濟增長具有乘數(shù)效應，技術進步能夠促使產(chǎn)業(yè)內(nèi)部生產(chǎn)要素優(yōu)化配置，促使生產(chǎn)要素在不同產(chǎn)業(yè)之間不斷流動，從而實現(xiàn)跨產(chǎn)業(yè)的技術要素融合，改變產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)。
1.2數(shù)據(jù)來源與變量選擇本文實證分析的數(shù)據(jù)來源于1996-2013年的《湖北統(tǒng)計年鑒》和《中國農(nóng)村統(tǒng)計年鑒》。具體地，每個變量采用的指標及個別變量的近似替代詳述如下：
（1）農(nóng)業(yè)經(jīng)濟總產(chǎn)出（Y）：用“農(nóng)林牧漁業(yè)總產(chǎn)值（單位：億元，當年價格）”指標來衡量；
（2）物質(zhì)資本變量（K）：現(xiàn)有文獻對于“物質(zhì)資本”的度量主要有兩種方法：一種是以“物質(zhì)費用”近似替代，另一種是用“固定資產(chǎn)”近似替代。本文認為以“物質(zhì)費用”近似替代農(nóng)業(yè)資本更符合生產(chǎn)的實際情況，所以本文釆用“農(nóng)業(yè)物質(zhì)費用”這一指標衡量農(nóng)業(yè)物質(zhì)資本投入，選取“農(nóng)林牧漁業(yè)中間消耗（單位：億元）”指標表示。根據(jù)現(xiàn)有文獻的研究結(jié)果及生產(chǎn)實際，預計物質(zhì)資本投入與農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長正相關；
（3）土地變量（M）：用“當年農(nóng)作物總播種面積（單位：萬畝）”指標來衡量。隨著湖北省城鎮(zhèn)化建設進程的不斷加快，農(nóng)業(yè)用地勢必會受到一定程度的影響；同時，農(nóng)用土地幾乎沒有大幅增加的可能，所以土地對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長的影響有待通過進一步的定量分析來解決；
（4）勞動變量（L）：人力資本理論認為，勞動投入應當是“勞動力數(shù)量”與“勞動力素質(zhì)”的綜合反映。本文釆用“教育存量法”對人力資本存量加以計量，由于無法獲取農(nóng)業(yè)部門勞動力受教育程度數(shù)據(jù)，所以本文采取近似替代的處理方法。根據(jù)鄉(xiāng)村從業(yè)總?cè)藬?shù)（單位：萬人，來源《湖北統(tǒng)計年鑒》）及平均每百個勞動力文化狀況比（來源《中國農(nóng)村統(tǒng)計年鑒》），加權(quán)加總得出人力資本總存量。其中“，平均每百個勞動力文化狀況比”將文化程度區(qū)分為文盲或半文盲、小學程度、初中程度、高中程度、中專程度、大專以上，本文根據(jù)每種受教育情況對應的實際受教育年限，對其分別賦值為0、6、9、12、12、16。綜合國內(nèi)外研究現(xiàn)狀發(fā)現(xiàn)，農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長中存在著“人力資本陷阱”，結(jié)合湖北農(nóng)村勞動力實際狀況，因此人力資本變量對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長的影響有待進一步證實。
（5）技術進步變量（T）：本文用序數(shù)變量來反映技術進步的變化趨勢，即1995年T值為1，按年份依次遞增，2012年T值為18。農(nóng)業(yè)經(jīng)濟會隨著農(nóng)業(yè)技術水平的提高而逐漸增長。
2擴展的Cobb-Douglas函數(shù)
Cobb-Douglas生產(chǎn)函數(shù)常用于分析經(jīng)濟生產(chǎn)系統(tǒng)中投入與產(chǎn)出的數(shù)量關系，是一種應用較為廣泛的生產(chǎn)函數(shù)形式，近年來被大量應用于農(nóng)業(yè)經(jīng)濟研究領域。Cobb-Douglas函數(shù)的基本形式為，其中，Y表示產(chǎn)出量；A表示技術水平；K表示資本投入量；L表示勞動投入量；分別表示資本、勞動投入的生產(chǎn)彈性值。結(jié)合湖北省農(nóng)業(yè)經(jīng)濟的實際發(fā)展特點，本文設定農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長方程為擴展的Cobb-Douglas函數(shù)，即（1）其中，Y表示農(nóng)業(yè)總產(chǎn)出，A表示技術水平，K表示物質(zhì)資本因素，M表示土地因素，L表示人力資本因素，T表示技術變化趨勢，為隨機擾動項。為了將農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長方程作線性化處理，對模型（1）兩邊取對數(shù)得分別度量各種影響因素對農(nóng)業(yè)總產(chǎn)出的影響大小，下面通過實證分析估計參數(shù)并給出合適的經(jīng)濟學解釋。
3實證結(jié)果與分析
根據(jù)第二部分選取的變量指標與收集的數(shù)據(jù)以及第三部分對模型的設定，利用Stata/MP13.1軟件對模型進行測算。繪制各變量的趨勢變化如圖1所示，可見，隨著年份的推移，lnM、lnL變動幅度很小，呈現(xiàn)相對穩(wěn)定的趨勢；lnY、lnK都隨著時間的增長而逐漸上升，并呈現(xiàn)“一致增長”的趨勢。畫出各解釋變量lnK、lnM、lnL相對于lnY的散點圖如圖2-圖4所示。圖2中，lnY與lnK高度正相關，lnY隨lnK幾乎呈“直線趨勢”變動；圖3中，lnY隨lnM變動的波動幅度較大，但從整體變化趨勢仍可以看出，lnY隨lnM的逐漸增加而增長，呈現(xiàn)正相關關系；圖4中，lnY隨lnL變動的波動幅度較大，變化率隨著時間的推移逐漸遞增。做出各變量的1階差分趨勢圖如圖5所示，2階差分趨勢圖。由圖可知，各變量的1階差分序列呈現(xiàn)不平穩(wěn)序列趨勢,但它們的2階差分序列都表現(xiàn)為平穩(wěn)序列趨勢。各變量的ADF檢驗結(jié)果見表1所示，由表1可知,變量lnY、lnK、lnM、lnL的水平序列與一階差分序列都非平穩(wěn)，二階差分序列是平穩(wěn)的。因此,該序列是2階單整序列。用OLS法對模型進行協(xié)整回歸，得農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長方程為：根據(jù)協(xié)整回歸的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各變量的系數(shù)符號基本與預期相符，lnK的系數(shù)在0.1%的水平上顯著，lnL的系數(shù)在1%的水平上顯著；，模型具有良好的擬合優(yōu)度，并且，說明各解釋變量的變化能很好地解釋農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長的變化。作出該回歸的殘差圖，從殘差圖中可以看出殘差值較為平穩(wěn)，模型的擬合的效果較好。
為進一步驗證水平序列l(wèi)nY、lnK、lnM、lnL之間是否存在著確定的協(xié)整關系，對殘差序列進行ADF檢驗。殘差項的DF統(tǒng)計量值為-6.717<-2.66（01%顯著性水平下的臨界值），故可以在1%的水平上拒絕“殘差項存在單位根”的原假設，所以，殘差序列為平穩(wěn)序列，即回歸變量之間存在著唯一的協(xié)整關系。根據(jù)回歸結(jié)果可知，lnK的系數(shù)為1.012且顯著，對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長作用明顯，說明物質(zhì)資本每增加1%，農(nóng)業(yè)總產(chǎn)出會隨之增加1.012%，隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中物質(zhì)消耗的增多，農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長較快，且增長幅度更大，這比較符合傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展模式，表明湖北的農(nóng)業(yè)發(fā)展還處于傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)階段；lnM的系數(shù)為0.104但不顯著，說明研究期間農(nóng)作物總播種面積對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟的變化沒有顯著影響，可能是因為農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展從土地要素獲得的動力已經(jīng)十分微弱，與傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)發(fā)展模式相比，現(xiàn)代農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長更多地依賴于農(nóng)業(yè)技術的應用；lnL的系數(shù)為-1.168且顯著，對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長作用明顯，說明人力資本每增加1%，農(nóng)業(yè)總產(chǎn)出會隨之減少1.168%；說明隨著農(nóng)村人力資本存量的增加，農(nóng)業(yè)經(jīng)濟不增反降。這很可能與湖北省的農(nóng)村地區(qū)勞動力過?；蛴捎谵r(nóng)業(yè)技術培訓不足等導致的農(nóng)民素質(zhì)過低有關，過剩的勞動力不能及時有序地從農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)移到二、三產(chǎn)業(yè)，這反而給農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長造成了負擔，農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展效率低下，從而產(chǎn)生抑制效應；T（技術變化趨勢）的系數(shù)為0.00578但不顯著，系數(shù)符號符合理論分析的預期，不過，由于本文限于數(shù)據(jù)的可得性，對于技術變化趨勢的處理不太精確，其顯著性有待進一步驗證。
4結(jié)論與對策建議
本文基于湖北省農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展的實際情況，通過構(gòu)建農(nóng)業(yè)經(jīng)濟增長模型——擴展的Cobb-Douglas函數(shù)實證研究了農(nóng)業(yè)經(jīng)濟內(nèi)生性因素投入對總產(chǎn)出的影響。實證分析基于1996-2013年的《湖北統(tǒng)計年鑒》和《中國農(nóng)村統(tǒng)計年鑒》的年度數(shù)據(jù)，測算了物質(zhì)資本、土地面積、勞動力投入、技術進步四個內(nèi)生性因素對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟總產(chǎn)出的效應。具體結(jié)論如下：
【關鍵詞】 甘露糖; ; 卵子相互作用; 膜融合; 卵母細胞
上世紀90年代有研究發(fā)現(xiàn)，人頭部存在甘露糖的互補分子，并且證明該類分子與受精過程直接相關。由于該類分子均具有甘露糖受體樣作用，因此稱之為甘露糖受體(mannose receptor，MR)。筆者和Gabriele等的前期研究提示，人MR可能在精卵的膜識別與融合時起介導作用[13]。筆者通過親和層析法提純的MR取代，直接作用于去透明帶的金黃地鼠卵母細胞，用透射電子顯微鏡觀察卵母細胞的變化，了解MR在精卵膜融合中的作用。
1材料與方法
1.1材料
1.1.1標本采集法采集健康有正常生育能力供精者，常規(guī)分析各項指標符合WHO標準[4]。
1.1.2動物6~8周齡敘利亞金黃地鼠(Mesocricetus auratus，福建醫(yī)科大學實驗動物中心提供；合格證號:閩實動條準第0107號)，純系鼠料飼養(yǎng)，每日補充新鮮胡蘿卜、雞蛋、牛奶和維生素E;動物飼養(yǎng)室以自然光和人工光照相結(jié)合，光暗時間比為12 h/12 h。選擇8~12周齡鼠用于超排卵實驗。
1.1.3主要試劑BWW培養(yǎng)液[5]，透明質(zhì)酸酶(美國Sigma公司)，胰酶(美國Difco公司)。
1.1.4主要儀器透射電子顯微鏡(Hu12A，日本Hitachi公司)。
1.2方法
1.2.1MR分離提純親和層析法從人蛋白萃取液中純化人MR[67]。
1.2.2凹玻板硅化甲基硅油用氯仿溶成5%溶液，移入經(jīng)超凈處理并干燥后的凹玻板內(nèi)靜置1 min;回收硅油，控干凹玻板，180 ℃恒溫箱中烤1 h;三蒸水沖去浮油，烤干。
1.2.3去透明帶地鼠卵獲取選取動情周期第1 d(按壓腹部見陰道口含乳白色分泌物)雌性金黃地鼠，于上午9~10時注射孕馬血清促性腺激素(PMSG，天津市華孚高新生物技術公司)50 IU;55~58 h后注射人絨毛膜促性腺激素(HCG，上海生物化學制藥廠)50 IU;16~18 h后將地鼠用乙醚麻醉后，斷頭解剖;剪下雙側(cè)輸卵管放入預冷(4 ℃)的BWW中準備取卵。將超排卵地鼠輸卵管移入凹玻皿中，在體視顯微鏡下用解剖針刺破輸卵管的壺腹部，擠出卵丘團并用BWW洗凈;用BWW溶解的0.1%透明質(zhì)酸酶消散卵丘顆粒細胞，用BWW洗滌多遍，洗凈卵子;用預冷(4 ℃)BWW溶解的0.05%胰酶消化透明帶。體視顯微鏡監(jiān)控消化結(jié)果，待透明帶變薄而松弛、欲失未失時立即將卵移至4 ℃預冷的BWW中洗滌3遍，去除殘留的胰酶，獲得裸卵母細胞。
1.2.4卵母細胞分組將獲得的去透明帶金黃地鼠卵母細胞分成4組(各15個):對照組，加入等量溶劑對照液; MR低、中、高濃度組，MR終濃度分別為0.95，1.43，2.86 μg/mL。各組置37 ℃孵育3 h。將卵母細胞移入凹玻板中，用37 ℃預熱的1%BSA/PBS洗細胞1次，3%戊二醛1.5%多聚甲醛(福建醫(yī)科大學電鏡室提供)固定40 min。
1.2.5電鏡標本制備與觀察用1%BSA/PBS洗細胞1次，將卵母細胞移入預先硅化的干燥凹玻板中(帶出的液體量約2 μL)，吸少量(5~7 μL)預先經(jīng)過補體滅活處理(56 ℃水浴30 min)的雞蛋清將卵母細胞包埋起來，在液滴周邊表面輕輕加入3%戊二醛/1.5%多聚甲醛300 μL，此時蛋清與卵母細胞一起凝成卵膠塊。用鑷子小心將其夾入含3%戊二醛1.5%多聚甲醛400 μL的Eppendorf管中，封口膜封好，4 ℃固定過夜。體視解剖鏡下將卵膠塊盡量修小一些，按常規(guī)1%OsO4后固定，梯度丙酮脫水，Epon618包埋，半薄切片定位;超薄切片用醋酸鈾和枸櫞酸鉛復染。透射電子顯微鏡觀察，比較各組卵母細胞超微結(jié)構(gòu)特點。
轉(zhuǎn)貼于
2結(jié)果
對照組細胞形態(tài)完整，細胞內(nèi)的細胞器輪廓清晰，胞膜下的皮質(zhì)顆粒(CG)較多，細胞表面的微絨毛較長而且數(shù)量較多;MR各濃度組卵母細胞質(zhì)膜下的CG比對照組相對減少，卵母細胞表面的微絨毛比對照組短而少，并伴有劑量依賴性，即隨著MR濃度的增加，微絨毛數(shù)呈減少趨勢(圖1)。MR各濃度組可見CG向卵質(zhì)膜靠攏并發(fā)生膜融合(圖2A);卵膜表面常見有CG胞吐后留下的“凹坑”，內(nèi)含未吐盡的CG內(nèi)含物(圖2B)。
3討論
卵子在與第一個發(fā)生質(zhì)膜融合后，就會發(fā)生一系列的變化，尤其是卵的激活。卵的激活主要表現(xiàn)在細胞內(nèi)鈣濃度的上升、CG的胞吐、細胞周期的恢復和母系mRNA的補充等[8]。但是具體是何物質(zhì)引起了這些變化，其作用機制如何，目前尚未闡明。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，人在頂體反應后MR主要集中在頭部赤道段和頂體后區(qū)質(zhì)膜上，而該區(qū)域正是首先與卵母細胞膜最早接觸并融合的部位，因而首次提出MR可能在精卵的膜識別與融合中起介導作用[1，3]。隨后，Gabriele等的研究也得出了與之相似的判斷[2]。
卵母細胞在受精時的最主要超微結(jié)構(gòu)特征變化，就是CG的胞吐及其內(nèi)容物的釋放，以及卵母細胞表面微絨毛的減少。受精導致卵母細胞CG胞吐的事實表明，CG胞吐是一種受體分子介導的受調(diào)分泌。CG胞吐后，其內(nèi)容物將促使發(fā)生透明帶反應、卵周隙中CG膜的形成等變化，從而阻止剩余穿透卵外被、保證單精入卵[811]。本實驗是將純化的人MR取代，直接作用于去透明帶金黃地鼠卵母細胞，用透射電鏡觀察卵母細胞的超微結(jié)構(gòu)，其結(jié)果與受精時卵母細胞的變化相符，更進一步直接表明了MR在介導精卵的膜識別與融合中發(fā)揮著重要作用，同時也提示，在卵母細胞質(zhì)膜表面存在著MR的互補分子。有實驗表明，卵母細胞上的結(jié)合位點可能在表面的微絨毛上，受精后卵質(zhì)膜表面的微絨毛數(shù)量減少可能是MR互補分子減少的一種直觀表現(xiàn)[1214]。
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（一）CG與CG藝術
Computer Graphics――計算機圖形學指的便是CG。大多數(shù)人對于電腦圖像和電腦圖形的概念是沒有明確的區(qū)分的，但兩者在本質(zhì)上仍有區(qū)別，圖形包含了幾何圖圖形的屬性，更重要的能夠模擬幾何模型的場景，而圖像則是純粹的以計算機中的為圖形式的灰度信息。所以，所謂的計算機圖形學主要就是利用計算機制作出令人煥然一新、具有真實感的圖形。而隨著計算機水平的不斷發(fā)展，以此拉開的產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)也逐漸壯大起來。國際上更是習慣于將計算機應用在視覺傳達技術中的設計領域稱之為CG。
而CG藝術則是依靠于電腦或是電腦繪畫軟件、設計軟件等進行藝術創(chuàng)作的數(shù)字視覺作品。CG藝術便是多數(shù)人口中的“數(shù)碼藝術”，這不僅僅是一項信息技術，也是一種繪畫藝術，就好比平面藝術中的海報設計、三維動畫、動畫視頻等都是建立在電腦視覺藝術創(chuàng)作的基礎之上。而CG藝術的本質(zhì)就在于能夠通過視覺技術給人們帶來新的藝術特征，這便是“數(shù)碼視覺特征”。
（二）CG藝術中的數(shù)碼繪畫
數(shù)碼繪畫是CG藝術中最為基礎也是最重要的一部分，對于是視覺感官效果發(fā)揮著重要的作用。繪畫作為藝術領域重要的一個模塊，如何在信息化時代利用好數(shù)碼技術的特性以此來進行繪畫視覺傳達，并熟練掌握其傳達的技巧和方法就顯得尤為重要。
在表現(xiàn)形式上，CG藝術主要以動態(tài)和靜態(tài)兩種模式為主。其中，數(shù)碼繪畫就屬于靜態(tài)模式，數(shù)碼繪畫不僅可以融合部分的平面視覺的素材及其表現(xiàn)手段，還能夠以獨立的藝術作品的形式而存在著。數(shù)碼繪畫作為CG視覺表現(xiàn)得基礎，能夠運用到繪畫的各個領域，比如平面設計中的CG插畫，游戲環(huán)節(jié)中的畫面設計及其人物設定等都能夠看到CG數(shù)碼繪畫的身影。
二、CG數(shù)碼繪畫與傳統(tǒng)繪畫藝術分析
（一）兩者的關系
傳統(tǒng)的繪畫藝術理論對于CG數(shù)碼繪畫的發(fā)展有著決定性作用，比如傳統(tǒng)的素描手繪、透析學等都同樣適用在數(shù)碼繪畫上。但從另一方面來看，兩者在本質(zhì)上還是有所區(qū)別的。首先，在工具媒介上，數(shù)碼繪畫能夠模仿傳統(tǒng)繪畫的寫實，以此達到惟妙惟肖的結(jié)果，然而從藝術家的角度來看，又未免毫無藝術價值。其次，在藝術價值的承載體上，傳統(tǒng)的繪畫藝術主要以“原畫”為承載體，而數(shù)碼繪畫主要是依據(jù)數(shù)字信息為承載體，因此傳統(tǒng)繪畫就有了原品贗品之分，而數(shù)碼繪畫則是圖片復印、打印出來的印刷品。這一方面的區(qū)別也使得數(shù)碼繪畫具有較強的傳播性，但是相對于傳統(tǒng)繪畫的藝術價值來說卻相對較低，而作為商業(yè)價值數(shù)碼繪畫藝術作品則高于傳統(tǒng)的繪畫藝術。
（二）CG數(shù)碼繪畫的藝術特征
1.規(guī)則性
數(shù)碼繪畫藝術沒有具體的語言表現(xiàn)，所有的繪制圖形都是通過特定的計算機代碼構(gòu)成，所以在視覺上具有可感知性。在此基礎上，也就使得數(shù)碼繪畫在創(chuàng)作的過程中依賴于一定的計算機工作程序，遵循一定的“規(guī)則”所進行的數(shù)字化設計。比如Ps中的各種濾鏡特效，就是通過開發(fā)者的參數(shù)調(diào)整，使得其畫面帶有絕對的均勻度和精細化。但是，這種規(guī)則性雖然使數(shù)碼繪畫帶有獨特的美學之感，但是較之傳統(tǒng)繪畫的真實趣味感，難免帶有一定的呆板、僵硬性。
2.虛擬性
對于繪畫的寫實，是西方古典繪畫的一種長期目標追求，文藝復興時期興起的繪畫藝術就是強調(diào)出繪畫的現(xiàn)實和真實性，在通過手繪所描繪出來的真實寫照，從而傳達出作者的渴望自由、和平的思想。而隨著數(shù)碼繪畫藝術的不斷發(fā)展，在多元化的繪畫軟件的輔助之下，使得數(shù)碼繪畫能夠?qū)⑵渥匀挥跋窀鼮楸普娴谋憩F(xiàn)出來，同時也將繪畫技術提升到了一個嶄新的高度。
三、CG數(shù)碼繪畫藝術的多元化發(fā)展表現(xiàn)
（一）大眾審美的數(shù)字化
隨著數(shù)碼信息技術走進各家各戶，人們對于數(shù)碼藝術的關注及其接受程度也不斷增強。對于數(shù)碼藝術中的影視畫面、游戲漫畫等數(shù)碼藝術表現(xiàn)的欣賞也有了質(zhì)的提升。數(shù)碼繪畫藝術深入人們的生產(chǎn)生活之中，對于數(shù)碼藝術的發(fā)展，人們不僅持以接受態(tài)度，更是期待著數(shù)碼藝術的發(fā)展能夠更上一層樓。就好比現(xiàn)今3D電影的不斷發(fā)展，也體現(xiàn)了大眾對于數(shù)碼藝術的認同和肯定。
此外，隨著數(shù)碼藝術及其大眾審美數(shù)字化的進程的不斷發(fā)展，也一定程度上影響了社會文化的消費結(jié)構(gòu)。例如數(shù)碼產(chǎn)業(yè)的逐步擴大，使得傳統(tǒng)的文化產(chǎn)業(yè)受到打壓，其消費市場也逐漸縮小。所以，在發(fā)展新型數(shù)碼繪畫藝術的同時，也應該注重其傳統(tǒng)文化的保護，維護兩種產(chǎn)業(yè)的和諧發(fā)展。
（二）游戲原畫藝術和游戲產(chǎn)業(yè)的影響
近年來，由于游戲產(chǎn)業(yè)的在市場中迅速崛起，這就使得其美術專業(yè)也隨之出現(xiàn)，這便是游戲中的原畫設計。相對于動畫中的原畫，游戲原畫設計就是所謂的游戲美術策劃，其設計師要根據(jù)策劃部門的策劃方案進行定稿設計，并配合相關的美工完成游戲模擬模型。游戲原畫設計主要利用了現(xiàn)代計算機中的傳統(tǒng)美術及其CG技術等一系列的信息技術進行綜合性開發(fā)設計，這也充分表明了數(shù)碼繪畫在游戲原畫設計中的重要性作用。就比如游戲的后期情景、人物的設定發(fā)展，都需要用到數(shù)碼繪畫技術。而隨著游戲的不斷開發(fā)與發(fā)展，也推動著游戲產(chǎn)業(yè)的前進步伐，使得游戲產(chǎn)業(yè)在市場經(jīng)濟中的步伐也愈發(fā)穩(wěn)定，這一定程度上依賴于數(shù)碼繪畫的進步創(chuàng)新。
（三）影視領域中的應用
在數(shù)碼繪畫技術的應用上不僅僅是動漫及其游戲中的原畫設計，在影視領域中的應用也是極為廣泛。例如諸多的好萊塢電影大片在正式開拍之前都會繪制出大量的原畫設計，以此來幫助演員、道具師等能夠更為直觀的感受電影所要表現(xiàn)出的視覺效果和人物特性。就比如《侏羅紀公園》中的畫面設計，當你帶上3D眼鏡時，就仿佛真的進入處侏羅紀時代，被體型龐大的恐龍所震懾。而在后期的影視制作中，也充分的利用了數(shù)碼繪畫技術來進行繪制，將整部電影布局和氛圍更好的通過數(shù)字信息更好的呈現(xiàn)在大眾面前。
（四）數(shù)碼繪畫與漫畫藝術
當前，新媒體技術正在改變著社會，改變著現(xiàn)代人的生活觀念、生活方式以及生活節(jié)奏，人們的生活正在隨著網(wǎng)絡、計算機的普及應用發(fā)生著翻天覆地的變化。而由于新媒體技術本身的特質(zhì)，這種改變不再是如工業(yè)革命一樣是單一方向的，而是多元的，互動的改變，各種審美趣味――娛樂的、低俗的、有品位的、富有情感的都交融在一起，產(chǎn)生了歷史性的交匯。詹明信教授在《晚期資本主義的文化邏輯》一書中指出：電影、電視、攝影等媒介的機械性復制以及商品化的大規(guī)模生產(chǎn)，這一切都構(gòu)筑了“仿像社會”。 也就是“虛擬世界”，人與人之間的交流互動、人對世界的感知都通過這個被模擬的虛擬世界。于是大量的娛樂性的、注重瞬間體驗的信息應運而生，而三維動畫正是憑借其空間感強、視覺效果強烈、成本相對較低、制作周期短等特質(zhì)在這個虛擬的世界中被廣泛使用。然而在廣泛使用的同時，我們也不難發(fā)現(xiàn)三維動畫這種工業(yè)化的動畫產(chǎn)品在表現(xiàn)上越來越模式化、機械化，這不得不使人們對這一現(xiàn)象進行反思。
在新媒體時代是以比特來傳播信息的，比特沒有重量，沒有時空障礙，能夠輕易地被復制和被傳播，并且可以被無限的人使用，衡量比特的價值正是由使用人數(shù)的多少來決定。比特的復制技術帶來了藝術的民主化，這種民主化表現(xiàn)在動畫領域有以下幾點表現(xiàn)：
1、生產(chǎn)方式和技術復制化。動畫的制作由個人化走向集體化，三維動畫的創(chuàng)作從來都是集體合作的結(jié)果。并且這種技術復制的快速對畫面質(zhì)量沒有損失。手繪動畫的制作中重視的是突破，是超越，認為重復、模擬無法展現(xiàn)其藝術生命力。但在新媒體時代，三維動畫像其他的工業(yè)產(chǎn)品一樣是批量生產(chǎn)出來的，技術湮滅了美感，在審美上用霸道的技術邏輯覆蓋了其藝術風格和個性，但這種技術又使原來一小部分人把玩的藝術變成了大眾與藝術的聯(lián)系，真正可以實現(xiàn)“人人都是藝術家”。
2、審美個人化。新媒體時代是真正個人的時代，個人有豐富的選擇，個人與各種環(huán)境之間如機器也能和諧自然的配合，信息的傳遞使藝術融入人們?nèi)粘Ｉ钪?，過去涇渭分明的各種藝術之間的鴻溝逐漸被高速傳遞的“比特”填平，藝術不但向商業(yè)消費轉(zhuǎn)移，也變成視覺符號轉(zhuǎn)移到商業(yè)藝術中間，如廣告、影視、平面設計、網(wǎng)絡界面、服裝美容等等。一方面人的眼睛無時無刻不受到視覺沖擊，無需再為審美而跑博物館、美術觀這些高雅藝術的聚集地；另一方面，眼睛又無不很快厭倦而需要新的、更強烈的視覺沖擊。比特的易傳播易復制的技術特性正好符合了這種大量而淺表的視覺需要。
作為社會變革的力量，新媒體技術的發(fā)展是歷史的潮流，不可抵擋。新媒體技術是一門綜合性的學科，其促使了技術和人文科學、科學與藝術之間的差距日益縮小。其改變了人們的時空觀念，形成了虛擬時空的概念。其次，在后現(xiàn)代語境下的社會處處充斥著市場的邏輯，所有的文化都成為符合市場機制、可供消費的商品這造成“日常生活審美化”現(xiàn)象，藝術也需要融入生活也成為消費品。但這項先進的技術應該更合理的使用，賦予美感和情感才是動畫藝術的最終目的，而手繪動畫的藝術語言有著包容性很強的藝術生命力，是隨著技術和各種藝術思潮的發(fā)展而向前的。正如美國動畫導演杰弗瑞?卡贊伯格所說，科技再成熟，鼠標也永遠取代不了人類手中的鉛筆，有一種神韻，是需要傳統(tǒng)的繪畫表現(xiàn)的。
進入數(shù)字化時代后，新媒體技術成為社會生產(chǎn)的主流，《數(shù)字化生存》中指出：“多媒體即是本質(zhì)上互動的媒體，隨著比特數(shù)字通用的出現(xiàn)而產(chǎn)生，同時，它與計算機成本降低、威力增大和呈爆炸式增長的局面息息相關?！毙旅襟w是指高技術化的多種媒體的融合，集圖、文、影像、聲音和互動性為一體，新媒體的運行又依賴于多種專業(yè)的軟件，如：平面軟件Adobo Photoshop、三維動畫軟件3Dmax，MAYA，特效視頻軟件Flash、AE，其既包含計算機、信息等工程技術，又包含美術、音樂、舞蹈、雕塑、建筑等藝術元素，又包含影視、網(wǎng)絡等傳播媒介，“生產(chǎn)力決定生產(chǎn)關系”， 隨著多媒體技術的飛速發(fā)展，計算機圖形CG（Computer Graphic）的概念被引入到動畫領域，計算機軟硬件虛構(gòu)的三維空間被廣泛的應用，三維動畫是整合了多媒體技術并且完全依靠多媒體而出現(xiàn)的一種新的動畫形式，三維動畫與手繪動畫相比有以下優(yōu)勢：一、能夠完成實拍不能完成的鏡頭。二、可修改性強，節(jié)省成本。三、無法重現(xiàn)的鏡頭可通過三維動畫來模擬完成。四、不受幀數(shù)的限制，渲染程序可以自動產(chǎn)生足夠的畫面。三維動畫不但大幅提高了動畫的制作效率并且產(chǎn)生了新的影像美學。但由于強勢的技術覆蓋了美感，三維動畫的發(fā)展狀態(tài)傾向于模擬現(xiàn)實，過分追求視覺上的刺激和新奇，作品被內(nèi)涵被炫目的技術掩蓋，缺少了情感，這也就背離觀眾觀看的初衷，很多作品都只是一種技術游戲。
就目前整個動畫領域而言，基本形成了三大類動畫的表現(xiàn)形式：三維動畫、手繪動畫（2D手繪動畫）、定格動畫。本論文認為在三維動畫出現(xiàn)之前，并沒有手繪動畫的觀念，手繪動畫是相對于三維動畫而言的。三維動畫的出現(xiàn)使傳統(tǒng)的動畫成為了手繪動畫，指在平面中繪制的動畫。
一方面多媒體技術自身在不斷更新技術，多媒體的發(fā)展也給手繪動畫帶來使用媒介上的拓展，目前有專門的軟件如Adobo Photoshop、Painter模擬油畫、水彩等繪畫效果，而電子筆也可以對屏幕進行手寫式的輸入，這些硬件設施的開發(fā)趨勢實際上是為手繪動畫實現(xiàn)無紙化奠定條件，在多媒體技術與手繪動畫結(jié)合后，手繪動畫有了更多的選擇，比如畫一幅畫面，可以單純用眼睛和手直接繪畫出來，也用像素來繪制，還可以將拍攝的影像通過軟件模擬成為具有手繪形式的畫面。韓國電影《青澀戀愛》中片頭與片尾就是真人拍攝與手繪風格相結(jié)合的方式進行實驗，此片表現(xiàn)的是現(xiàn)代男女純真的愛情生活，影片基調(diào)清晰樸實，尤其是片頭與片尾的動畫對烘托影片氣氛起到了關鍵的作用，動畫采用的是真人實拍與CG技術結(jié)合的方式，呈現(xiàn)出的卻是流動的、光影斑駁的水彩質(zhì)感。此動畫運用了圖像處理、三維動畫等技術手段，畫面既有飽滿的水彩質(zhì)感和紙張的粗糙感，又有三維的景深和鏡頭語言。由此可見，多媒體技術也在改變對技術運用的觀念，將技術的生硬質(zhì)感蛻化成靈活多變的藝術風格。
另一方面手繪動畫家也在探索手繪動畫的美感與多媒體技術結(jié)合的方式。在宮崎峻的《千與千尋》中，他就使用了CG技術制作飛濺的千尋的淚花。日本的動畫電影現(xiàn)在使用線條勾勒，背景則使用CG技術來表現(xiàn)，再經(jīng)過電腦校色，使得背景空間感強，看起來十分逼真。
本論文認為這些都還是CG與二維動畫結(jié)合的淺表嘗試，希望保持手繪動畫的畫面質(zhì)感又增加畫面的維度空間，但依然將手繪動畫的制作工藝看成是手繪動畫的精髓，用CG只是作為進行輔助手段。
相對來說，中國對于手繪動畫這一新的發(fā)展方向的探索更加徹底和深入， 2007年，中國中央電視臺播放了一部探索紀錄片《大唐西游記》（見圖），這是中國動畫的一次突破，非常成功的實現(xiàn)了手繪與CG的互動結(jié)合。這部影片全部由手繪后經(jīng)由CG處理的畫面構(gòu)成。沒有一個實地拍攝的鏡頭，這在全球的紀錄片的歷史上還是第一次。人物造型以中國傳統(tǒng)彩塑的造型為表現(xiàn)形式?！洞筇莆饔斡洝窂钠平庵袊裨捁适隆段饔斡洝分械娜宋飦須v開始，講述公元7世紀唐朝僧人玄奘一生的傳奇經(jīng)歷。在敘事畫面的表現(xiàn)上采用了的唐卡表現(xiàn)形式，唐卡是一種歷史悠久的藏傳佛教中的繪畫藝術，從公元七世紀發(fā)展至今。以唐卡為造型符號又暗合了印度佛教在中國的傳播過程這一主題，選用彩塑和唐卡的結(jié)合，既是兩種藝術形式的結(jié)合，也是藝術和技術的結(jié)合。
《大唐西游記》創(chuàng)作的實踐意義在于：首先從技術的角度看, 《大唐西游記》沒有對CG技術無節(jié)制地濫用，而認識到藝術風格才是傳播主題的最核心信息，它突破了二維和三維空間的界限，產(chǎn)生了一種虛擬的時空感，并且產(chǎn)生了一種新的美學影像。《大唐西游記》是中國人第一次將手繪、CG、紀錄片‘三位一體’的影像試驗。是一次科技和藝術的成功結(jié)合。在如何正確利用先進的技術，如何使人類悠久的歷史文化和藝術在新的時代煥發(fā)生命力這一命題上給當代動畫人以啟迪。
綜上所述，我們可以看到：手繪動畫還沒有到成熟的階段，手繪動畫的藝術語言以及表現(xiàn)形式還在不斷的充實豐富。手繪動畫與新媒體技術之間并不對立與矛盾，而是可以相輔相成的。三維動畫與手繪動畫最大的矛盾在于思考的方式上的差異，三維動畫師需要具備物體三維形狀的能力，會先“畫”出真正存在的東西，理解所畫出東西的立體構(gòu)象并且要灌注設計的理念，視作品為產(chǎn)品。而手繪動畫師是以平面二維空間的概念進行構(gòu)思，一方面有萬千種材料、表現(xiàn)手段、風格進行選擇作為媒介，傾向于反理性和反智性的思維。另一方面，這些媒介的選擇最終是以體現(xiàn)動畫師的個性與世界觀為原則的。手繪動畫的藝術語言探索還遠沒有到盡頭，關于手繪動畫與新媒體技術的互動性開發(fā)還有待開發(fā)，也許有一天，我們打開電腦就會有一幅水墨畫打開，觸碰畫軸就會有朵朵的墨花綻放。手繪動畫在整個動化領域?qū)⒁云洫毺氐乃囆g語言綻放出奇異的光彩。
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中圖分類號：J218.5 文獻標識碼：A 文章編號：1003-9082（2014）04-0394-01
一、引言
隨著社會經(jīng)濟的迅速發(fā)展和科學技術的全面進步，計算機與CG插畫正蓬勃發(fā)展。CG插畫隨著社會的發(fā)展越來越具有社會性和發(fā)展性。
商業(yè)活動的推廣使的其內(nèi)容和形式發(fā)生了很大的變化。在一定程度上大大提升了人們的欣賞水平，從而促使插畫的藝術表現(xiàn)形式更加獨特。例如在宣傳時的海報效果就可以更好的吸引人們的眼球，并且隨著網(wǎng)絡文化迅速發(fā)展形成了一個單獨的門類即原畫。結(jié)合了深厚文化底蘊的原畫不僅在畫面上更加吸引人，而且讓人們感受到CG原畫內(nèi)涵，從而達到更好的宣傳效果。在設計上，中國元素有別于其他民族文化的傳統(tǒng)，它成為創(chuàng)作的素材以及靈感的來源。它可以經(jīng)過藝術的形式改變，最終成為一個具有全新意義卻依然保留文化底蘊的作品。
這些具有中國本土特色的作品更能引起人們的共鳴，并且能夠吸引視覺的作用。符合我們大眾的“讀圖時代”。
二、中國元素在CG插畫設計目的
“中國元素”不僅僅是傳統(tǒng)文化的一種象征。更是一個民族歷史的積淀。以中國元素作為創(chuàng)意制作出來的作品都具有不可估量的意義。誠然，有一種不可爭辯的事實，當世界經(jīng)濟離不開持續(xù)增長的中國經(jīng)濟時，世界文明也離不開中國文化。因為中國文化是人類不可或缺的重要組成部分。孕育著中國文化精神的“中國元素”將會為中國品牌走向世界奠定自信，它會承擔起融入世界、影響世界的時代使命。
在現(xiàn)代社會中，插畫不僅僅在出版作品中被廣泛運用，也逐漸在設計領域中被使用。如海報，宣傳、企業(yè)標志等等。中國純商業(yè)性的插畫在在改革開放后才逐步被認知到，導致中國在商業(yè)插畫領域中起步比較晚，中國插畫要在日愈激烈的插畫市場上脫穎而出，所以中國插畫要在設計中體現(xiàn)自身的優(yōu)勢和個性，才能在激烈的競爭中站穩(wěn)腳步。
三、中國元素在CG插畫表現(xiàn)手段
在現(xiàn)代CG插畫的設計角度中，“中國元素”是插畫創(chuàng)作的靈感來源和素材。它可以千變?nèi)f化，最終創(chuàng)作出一個全新的作品。中國元素具體表現(xiàn)手段分為三個部分。
1.民間故事的借鑒
民間故事是民間文化的一個重要組成部分，它種類繁多，內(nèi)涵深厚，有著獨特的文化底蘊，和高度的審美能力。在它們當中流傳和發(fā)展著豐富的民間美術及傳統(tǒng)文化，這些都是我國傳統(tǒng)文化精髓之一，是民族文化重要組成。這些是中國五千年優(yōu)秀歷史遺留下的的傳統(tǒng)文化積淀。中國的這種文化氣質(zhì)與西方追求夸張的審美不同。我們主張的是淡雅清秀的美。
例如中國很成功的商業(yè)電影寶蓮燈，哪吒鬧海都是運用中國民間故事為基礎所創(chuàng)作出來的佳作。電影寶蓮燈，王敏的三國系列《一騎當千》在韓國都引起極大的轟動。這些作品都無處不體現(xiàn)了具有劃時代創(chuàng)作意義的民族特色。
2.傳統(tǒng)紋樣的運用
傳統(tǒng)紋樣體現(xiàn)在中國的傳統(tǒng)圖形，這些傳統(tǒng)圖形很常見，例如有精致的家具木雕、云紋、旗袍的刺繡。因此在當設計師進行CG插畫創(chuàng)作時，哪怕角色只是穿著穿著龍紋的服飾足以體現(xiàn)角色的富貴。我國傳統(tǒng)紋飾種類繁多，內(nèi)容豐富。它即代表中華民族的悠久歷史，也是世界文明寶庫的重要財富。中國各個時期的歷史紋飾都不同。新時期的的自然紋飾，商周時期的青銅紋飾，以及佛教傳入中國與傳統(tǒng)紋飾的結(jié)合。這都說明傳統(tǒng)紋飾不論在設計裝飾上還是文化底蘊上都是具有很高的造詣。同時中國人也很注重于這些元素的潛在功能。比如家中會張貼財神圖，商家會在店里擺放敬香的香爐都是用來祈求財源滾滾的意愿。賀壽的時候都會擺放壽桃來慶賀延年益壽的祝福…
如祥云紋樣：代表吉祥如意的寓意 蝙蝠紋樣：因福蝠與“?！蓖蚬蚀砦甯ＥR門之意。
3.傳統(tǒng)物件的運用
我國具有具體意義的物件數(shù)不勝數(shù)。每個物體代表著不同的含義。就拿《福善吉慶》來說，年畫中每個物件都有著吉祥的寓意：如團扇代表“團圓”、蝙蝠代表“?！?、寶戟裝飾的磬，暗諧“慶”、供著的佛手、侍女手持的玉如意都是中國最吉祥的物件，中間的連生的瓜果代表著子孫連綿，多子多福。聰明智慧的中國人，把美好的愿望寄予在生活中每一個細節(jié)之處，讓我們的千古文明得以綿延世代。我在設計中插入了代表辟邪旺財：五帝幣 代表吉祥如意：玉如意和如意結(jié)。
四、中國元素在cg插畫中運用的意義
不同的國家在設計的側(cè)重點上都有著自己文化的特色，我國的歷史文化豐富多彩。所以中國插畫要在設計中體現(xiàn)自身的優(yōu)勢和個性，才能在激烈的競爭中脫穎而出。插畫不僅具有商業(yè)實用性，更加具有藝術觀賞性。好的設計產(chǎn)品不僅能提升產(chǎn)品的知名度更能滿足消費者追求藝術欣賞的需求性。所以中國插畫融入民族元素是中國未來插畫的必然趨勢。民族素材將是我們永久的設計基奠，只有這樣才能是中國插畫真正走出國門。
“中國元素”不僅僅是傳統(tǒng)文化的一種象征。在世界經(jīng)濟高速發(fā)展的時代，世界文明也離不開中國文化。因為中國文化是人類不可或缺的重要組成部分。孕育著中國文化精神的“中國元素”將會為中國品牌走向世界奠定自信，它會承擔起融入世界、影響世界的時代使命。
五、 靈活運用“中國元素”
插畫是一種有著悠久歷史的表現(xiàn)形式，如今隨著計算機技術的不斷創(chuàng)新，插畫藝術也從傳統(tǒng)單一的方式逐漸向CG市場進軍。并且成為現(xiàn)代視覺傳達的主流。因此在CG插畫創(chuàng)作中，應體現(xiàn)中國的歷史文化特色，傳統(tǒng)紋飾、傳統(tǒng)器物等。這樣才能更好適應現(xiàn)代社會對CG插畫的需求。我們要學會在插畫設計中融入這些傳統(tǒng)元素，以達到更好的藝術效果將傳統(tǒng)圖形藝術結(jié)合到現(xiàn)代插畫的設計中，這是設計出具有主張性、時代性和國際性的現(xiàn)代標志的關鍵。但這樣的一種結(jié)合，并不是指對傳統(tǒng)圖形進行純粹的拷貝或者簡單的挪用，而是去認識和了解傳統(tǒng)圖形，并在此基礎上，逐步挖掘、變化和改造傳統(tǒng)圖形，讓傳統(tǒng)圖形成為設計的一個新的創(chuàng)意點和啟示點，從而設計出煥有生命力的中國型現(xiàn)代標志。
六、總結(jié)
通過這次做的論文。讓我對角色插畫的繪制有了更深一步的了解。一個成功的插畫不僅可以讓觀賞者達到視覺的享受更能達到文化層次的深度。現(xiàn)今中國的插畫行業(yè)還處于初步發(fā)展階段，中國的插畫要的激流中涌進還需要找到適合自己的道路，要走自己的風格，臨摹和抄襲始終不是自己的東西，我個人認為要將中國元素加入到插畫中去是一條值得走下去的發(fā)展之路。
參考文獻
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目前，高校中的大學生受到考試和擇業(yè)方面的壓力，普遍存在著重視英語而忽略母語的現(xiàn)狀?！?〕他們認為母語說了這么多年，表達起來肯定沒問題，而實際情況又如何呢？為全面了解大學生在母語書面表達方面的真實水平，我們隨機從我校吉林大學的15個學院中抽取了300份本科生的畢業(yè)論文，所涉及的專業(yè)囊括了人文學部、社會科學部、理學部、工學部、信息科學部。我們計劃通過對以上學院本科生畢業(yè)論文的實際調(diào)查工作，來系統(tǒng)總結(jié)學生在書面表達方面具體存在哪些問題，分析這些問題產(chǎn)生的原因，進而嘗試有的放矢地提出一些建設性意見。
一、從對本科生畢業(yè)論文的調(diào)查中總結(jié)出的實際問題
“沒有調(diào)查就沒有發(fā)言權(quán)?！蔽覀儗W生論文進行了細致深入的調(diào)查研究工作，現(xiàn)把學生在畢業(yè)論文中普遍存在的語言表達方面的問題作以歸納總結(jié)。（說明：所舉例句中下劃橫線的內(nèi)容表示存在語病部分；括號里的詞句表示應該添加或更改替換的內(nèi)容）
（一）詞語使用問題。
1.生造詞現(xiàn)象
例如：
我勤奮，畫兒也以全新的面貌回對于（回饋）我。
二者之間存在著親密纏聯(lián)（錯綜復雜）的復雜關系。
同樣生存在市場環(huán)境下的企業(yè)，為什么有的能夠長久不衰，甚至越做越大，
越來越強；有的卻困難重重，舉腳維難（舉步維艱），曇花一現(xiàn)？
2.詞語單一化
例如：
其次，技術革命尤其是電信革命，使國際市場尤其（特別）是金融市場，實現(xiàn)
真正的全球化。
3.詞語與所在句式的結(jié)構(gòu)語義不符
例如：
cis，cis--1,3,5--H3CTC作為一個飽和的輪換的含有配體的羧酸，已經(jīng)被
表明（證明）具有多樣可變的分子調(diào)和性。
句中“表明”與所在的“被字句”語義不符中?！氨蛔志洹钡木涫秸Z義表被動，它要求句式中的動詞是表示動作意義的及物動詞。所以，我們把它改為動作意義強的“證明”。
4.關于詞語搭配問題的歸納
1）語義角度的不搭配
例如：
經(jīng)濟發(fā)達（寬裕）的東部人長假期間的遠行給我國中西部經(jīng)濟的發(fā)展帶來了較大活力。
去年，每一部能夠吸引我們眼球的電影幾乎渾身上下都掛滿了CG華麗的影子。
2）語音角度的不搭配
例如：
淺色系列已經(jīng)從舞臺的背后（幕后）走到臺前。
3）語法角度的不搭配
例如：
音樂劇是居于雜耍和歌劇兩端當中（中間）地帶的音樂形式。
句中雖然“中間”和“當中”都作為方位名詞，意義相似，但二者的語法功能不同?！爸虚g”可以作為定語修飾“地帶”，而“當中”卻沒有這樣的語法功能。
（二）句子結(jié)構(gòu)問題
1.結(jié)構(gòu)殘缺
句中的主語、謂語、賓語、修飾語等成分的殘缺都會給表義帶來障礙。
例如：
由于原子間的電子發(fā)生了共有化以后，（？）會使原來的原子能級轉(zhuǎn)化為能帶。
相對于內(nèi)部董事而言，獨立董事更能站在公平客觀的立場上（？），從而提
高公司決策的科學性。
本文通過營養(yǎng)物質(zhì)含量的對比來實現(xiàn)使全國人認識納豆、接受納豆，使納豆
在中國得到普及（的目的）。
如果真要跟平面設計性質(zhì)比較，那么商業(yè)攝影的特點有點（與之）相似。
2.結(jié)構(gòu)冗余
句子結(jié)構(gòu)本已完整，意思也清楚，但還使用了一些不必要的詞語作句子成分。
例如：
家用電器包裝裝潢設計應具備有科學的特征。
因此，建立合作安全成為東北亞各國的一致共識。
中謂語“具備”和“有”是同樣的意思，有同樣的語法作用，所以，應刪除一個?！肮沧R”本身就表示共同一致的認識，所以，定語“一致”語義與之重復，應該刪除。
3.語序不當
例如：
他提供了被認為是一種極具前途的環(huán)境污染深度凈化技術。
脂肪氧化是僅次于微生物的導致牛肉失色、變質(zhì)的主要因素。
劃線的多重定語成分，順序應該調(diào)整為“一種被認為是極具前途的環(huán)境污染深度凈化技術”。定語“導致牛肉失色、變質(zhì)”是“脂肪氧化”和“微生物”比較的方面，所以它應該放在動詞前作狀語。即“脂肪氧化在導致牛肉失色、變質(zhì)方面，是僅次于微生物的主要因素。
4.句式雜糅
下面，我們就以典型的PIP文件交換軟件為例來研究對PIP模式的幾種主要形式
進行分析。
例如：
美國、加拿大、日本、韓國等以大理石花紋豐富程度為評定依據(jù)標準的應用，
已使這些國家著力發(fā)展大理石花紋豐富的高檔牛肉。
句中劃線部分混雜了兩種句式：“研究PIP模式的幾種主要形式”和“對PIP模式的幾種主要形式進行分析”，就形成了句式混雜的錯誤表達。另一句中劃線部分把兩句“以大理石花紋豐富程度為評定依據(jù)標準”和“這一標準的應用”通過“標準”一詞牽連在一起。即把前一句的后半句用作另一句的開頭，硬把前后兩句雜糅在一起。
5.句式結(jié)構(gòu)與語義不搭配
例如：
人類社會發(fā)展的基本軌跡是：原始社會—農(nóng)業(yè)社會—工業(yè)社會—信息社會。人工智能的目標是用計算機模擬人的智能，以最大限度地解放和延伸人的智能，無疑是信息社會的制高點。語言是人思維的物質(zhì)外殼，人不可能離開語言而具備真正屬于人的高級智能。因此，模擬人類語言智能的自然語言處理無疑是人工智能的重要研究方向。然而，迄今為止的研究表明，在可以預見的將來，語義處理將是自然語言處理的瓶頸所在。原因是語義十分復雜，而基于現(xiàn)有計算機軟硬件的自然語言處理要求語義形式化。解決這一問題的根本之道是：探索新的句法標注模型，進行大規(guī)模的語義標注，基于語料庫進行語義知識獲取和自然語言處理。
一、句法標注模型
語言的復雜性在于語言與認識的關系。語言具有意義，而意義是入對主客觀世界的認識結(jié)果。主客觀世界的復雜性決定了意義的復雜性，進一步?jīng)Q定了語言的復雜性。語言本身又可以視為人的主客觀世界中的一部分，因此語言研究是一種特殊的認識活動，是人對語言的認識。由此可見，語言離不開認識。人對主客觀世界的認識可以如此描述：認識主體借助認識工具按照認識方法處理認識對象獲得認識結(jié)果。認識是由多種認識因素(主體、工具、方法、對象)共同作用的活動，認識結(jié)果是這一活動的產(chǎn)物，被多種認識因素共同決定，任何一種認識因素的改變必然導致認識結(jié)果出現(xiàn)或大或小的差異。顯然，認識結(jié)果與認識對象不能等同，是認識主體對認識對象的選擇性反映，認識具有主觀能動性。從這個意義上講。認識不可能也不應該去被動地還原認識對象，而是從符合主體目的性出發(fā)，力求簡單有效地描述和預測認識對象。借用模型的概念，認識結(jié)果就是認識對象的模型(model)，認識就是建立認識對象的模型，簡稱建模(modeling)。這是一種實用主義認識觀。
模型一般分為心理模型(psychological model)、數(shù)學模型(mathematical model)和物理模型(physical model)。心理模型是認識對象在人認識中的定性關系，是數(shù)學模型的基礎；數(shù)學模型是認識對象在人認識中的定量關系，是物理模型的基礎；物理模型是人借助特定材料和工具按照認識對象的數(shù)學模型實現(xiàn)的物質(zhì)結(jié)構(gòu)。傳統(tǒng)意義上的建模主要指建立數(shù)學模型和物理模型，一般意義上的建模還包括建立心理模型。人的認識能力是有限的，表現(xiàn)在：人不能建立任意認識對象的心理模型，也不能建立任意心理模型的數(shù)學模型，也不能建立任意數(shù)學模型的物理模型。由于具有明確的實用主義特點，建模在理工科領域大行其道，在文科領域也逐漸受到青睞。人類將二進制數(shù)學模型成功實現(xiàn)為晶體管物理模型，并開發(fā)出越來越復雜和先進的計算機軟件和硬件，從而進入信息時代。20世紀以來一些主要或次要的語言理論都或多或少應用了數(shù)學模型，特別是一些面向語言計算的語言理論。隨著計算機技術的飛速發(fā)展，人們對計算機自動或輔助處理語言信息的需求越來越大。但計算機的根本缺陷在于，凡是不能建立數(shù)學模型的信息都無法處理。傳統(tǒng)語言理論往往只在心理模型層面定性研究，無法滿足這一需要。因此有必要引入數(shù)學模型研究語言，稱為語言數(shù)學模型，簡稱語言模型(1anguage model)。統(tǒng)計語言模型(sta-tistical language model)就是一個成功的例子。但統(tǒng)計語言模型的性能取決于訓練語料的規(guī)模和質(zhì)量。目前，由于語料的不斷積累和計算機技術的不斷進步，語料規(guī)模已不成問題，語料中包含語言知識的數(shù)量和質(zhì)量才是關鍵。
計算機的語言知識主要來源于人。將語料中包含的語言知識標注出來，有助于計算機獲得更豐富、更有價值的語言知識，從而提高語言處理水平，這就是語料標注(corpus tagging)。一般認為主要包括詞匯標注(1exical tagging，分詞、詞結(jié)構(gòu)標注、詞性標注、詞義標注等)、句法標注(syntax tagging，語法樹標注、語義樹標注等)、語篇標注(discourse tagging，語體標注、領域標注等)等內(nèi)容。經(jīng)過標注的語料還可以用于語言學研究、語言教學、語言測試、詞典編撰等諸多理論研究和實踐應用領域，越來越受到人們重視，并形成一門新興學科——語料庫語言學(corpus linguistics)。目前，相對句法標注，詞匯標注有更成熟的規(guī)范、準確率更高的技術和更大的標注規(guī)模。句法標注的主要困難在于，沒有一個真正成熟的語法或語義標注模型。句法結(jié)構(gòu)尤其是語義結(jié)構(gòu)很難統(tǒng)一描述，現(xiàn)有的句法理論還不完善，難以制定統(tǒng)一規(guī)范，標注主觀性很大，自動標注準確率比較低。因此，句法標注成了語料標注的瓶頸問題。由于句法知識在語言知識中的重要地位，有理由相信：如果有了大規(guī)模、高質(zhì)量的句法標注語料庫，圍繞語料庫的各種研究和應用有可能在現(xiàn)有基礎上產(chǎn)生質(zhì)的飛躍。因此，研究句法標注模型應是當務之急。語料庫語言學屬于交叉學科，句法標注模型是語料庫語言學的基礎理論，又與語言學的句法理論密切相關。一方面可以借鑒現(xiàn)有句法理論，另一方面，也可以從語料庫語言學的角度研究句法，提出新的句法標注模型。
二、現(xiàn)有句法標注模型
句法標注(Syntax Tagging，ST)以句子的語法知識和語義知識為標注對象，是語料標注的重點、難點所在，要以一定的語法理論為基礎。根據(jù)語法理論制定的句法標注規(guī)則、過程和結(jié)果，稱為句法標注模型(Syntax Tagging Model，STM)。短語結(jié)構(gòu)語法(PhraseStructure Grammar，PSG)和依存語法(DependencyGrammar，DG)是現(xiàn)有句法標注的兩種基礎語法理論，彼此卻有很大的不同?；赑SG的句法標注模型稱為短語結(jié)構(gòu)句法標注模型(PSG—based Tagging Mod—el，PSGTM)，基于DG的句法標注模型稱為依存句法標注模型(DG—based Tagging Model，DGTM)。根據(jù)現(xiàn)有語料標注的實踐結(jié)果來看，PSGTM與DGTM都存在一定缺陷。
美國語言學家喬姆斯基(Noam Chomsky)于1957年出版專著《句法結(jié)構(gòu)》，從而奠定了短語結(jié)構(gòu)語法(PSG)的理論基礎。其后發(fā)展起來的許多語法理論可以直接或間接歸到這一流派，如中心詞驅(qū)動的短語結(jié)構(gòu)語法(HPSG)、廣義短語結(jié)構(gòu)語法(GPSG)等。到目前為止，PSG仍然是最重要的句法標注基礎理論，為世界上眾多語料庫項目所采用和發(fā)展。法國語言學家特思尼耶爾(Lucien Tesnire)于1959年出版專著《結(jié)構(gòu)句法基礎》，從而奠定了依存語法(DG)的理論基礎。其后發(fā)展起來的許多語法理論可以直接或間接歸到這一流派，如詞匯依存語法(WD)、概念依存理論(cD)、核心依存理論(KD)等。相對PSG而言，DG偏重于語義，在CD、KD上表現(xiàn)得十分明顯。另外，DG更簡潔、直觀、經(jīng)濟，適應性更強，因此反而有后來居上之勢，目前已經(jīng)成為世界上較為通用的句法標注基礎理論。不過，在具體的句法標注實踐中DGTM還是暴露出一些問題，“對一些沒有明確依存關系的成分，標注起來則有些力不從心”，存在“依存失敗”現(xiàn)象，最突出的是難以標注缺省結(jié)構(gòu)。缺省結(jié)構(gòu)一直是句法標注中經(jīng)常出現(xiàn)而且很難解決的問題。
人類的自然語言符合經(jīng)濟性原則，而缺省結(jié)構(gòu)恰恰體現(xiàn)了這一原則。借助句子的前后上下文省略一些成分，人們?nèi)匀荒軌蚶斫猓珜τ嬎銠C來說卻是一種挑戰(zhàn)。句法標注的根本目的是讓計算機能夠正確提取句子的語法和語義知識。缺省結(jié)構(gòu)在真實語料中大量出現(xiàn)，常常使得原本正常的句法結(jié)構(gòu)變得異常，難以按已有規(guī)則進行標注。這是任何句法標模型都必須面對的問題，目前PSGTM和DGTM都還沒能夠很好地解決。以DGTM為例，在很多情況下，DGTM不但不能正確標注缺省結(jié)構(gòu)，反而在一些語言規(guī)則的強制限定下給出違背真實語法或語義結(jié)構(gòu)的標注結(jié)果，形成干擾信息。請看以下4個句子：
句1：我看一下下書
句2：(真是好書啊?)我看一下
句3：我看一本書
句4：(好多書啊!)我看一本
句2是句1的賓語省略句，句4是句3的賓語省略句。(為簡便起見，把“一下”、“一本”作為一個詞處理)。
問題出在句4。句1和句3的依存結(jié)構(gòu)是不同的，然而句2和句4卻有了相同的依存結(jié)構(gòu)。因為句4省略了“書”，根據(jù)DG理論，“一本”必須依存于獨立謂語成分“看”。于是“看一本”和“看一下”依存結(jié)構(gòu)相同，實際上違反了句3的正確結(jié)構(gòu)。當然，我們可以采取補救措施，為d1標注一個特殊的依存關系屬性Cerror(即依存失敗)，但這不是好辦法。
三、改進DGTM
美國認知語言學家蘭蓋克(Ronald w.Langach.er)分別于1987年、1991年出版專著《認知語法基礎》一、二卷，開創(chuàng)了認知語法(CG)理論，關于語法結(jié)構(gòu)有如下觀點：如果一個構(gòu)件A使另一構(gòu)件B的一部分抽象變?yōu)榫唧w，那么構(gòu)件A就叫做概念自主(coneep.tually autonomos)的構(gòu)件，構(gòu)件B就叫做概念依存(conceptually dependent)的構(gòu)件。
舉例來說：獨立地看，“一本”隱含一個抽象的、可數(shù)的、可用“本”量化的事物，可表示為“一本(x)”?！皶笔埂皒”變得具體，因此“書”是概念自主的，“一本”是概念依存的。從信息表達的角度來看，“書”表達了相對完整而具體的信息，因此是概念自主的；“一本”表達了不完整不具體的信息，因此是概念依存的。從數(shù)學表達式的角度來看，“一本”類似函數(shù)，“書”類似參數(shù)，函數(shù)的地位顯然是第一位的，決定了對參數(shù)的處理過程和返回參數(shù)。例如，“舊書”與“一本書”的區(qū)別不在“書”，而在“舊”和“一本”。再從閱讀認知過程來看，當人們讀到“一本”時，實際上已經(jīng)在期待“一本”后面那個具體事物跟著出現(xiàn)。為什么我們覺得“我看一本”是缺省句?因為“看”和“一本”相對“書”都是概念依存的，因此人們會判定，“我看一本”的缺省成分可能是“書”。而讀到“我看書”時，人們不會認為這是一個省略句，因為“書”表達的信息已經(jīng)自足了。
由此有足夠的理由認為：在句法結(jié)構(gòu)中，“一本”應是“書”的父結(jié)點，而不是按傳統(tǒng)的補足中心原則，中心成分總是限定成分的父結(jié)點。依存成分是自主成分的父結(jié)點，這一原則可以稱為依存中心原則(Dependency Head Principle，DHP)。采取這種原則的DGTM必然會有不同的標注結(jié)果。
深入研究發(fā)現(xiàn)，僅僅采用DHP是不夠的，DGTM的其他參數(shù)也需要改變。例如，“看(x)”和“一本(x)”這兩個表達式在與其他詞語組合時是有區(qū)別的?！翱?x)”與“我”組合時由“看”與“我”產(chǎn)生聯(lián)系?！翱础迸c“一本(x)”組合時卻是“x”(書)與“看”發(fā)生聯(lián)系。代表表達式與其他詞語組合的成分稱為返回參數(shù)，不同表達式的返回參數(shù)是不同的。例如?！耙槐?x)”返回參數(shù)為“x”，“看(x)”返回參數(shù)為“看”。正因為如此，表達式“看(一本(書))”成立，“一本(看(書))”不成立。另外，表達式“(x)一下”的返回參數(shù)為“x”，即“看”；表達式“(x)看”的返回參數(shù)為“看”。根據(jù)這些定義，句1、2、3、4的改進DGTM。
根據(jù)函數(shù)、輸入?yún)?shù)、返回參數(shù)的關系，各句結(jié)構(gòu)的逆構(gòu)造過程如下：
句1：我看一下書：(((我)看(x))一下)(書)=((看(x))一下)(書)=看(x)(書)=看(x=書)
句2：我看一下：((我)看(x))一下=(看(x))一下=看(x)
句3：我看一本書：((我)看(x))(一本(書))=看(x)(書)=看(x=書)
句4：我看一本：(我)看(一本(x))=看(x)
句1和句3的x有明確取值，為完整句。句2和句4則是缺省句。基于看(x)和一本(x)的知識，可以預測并判定缺省結(jié)構(gòu)及其成分。
直觀看來，改進DGTM與原DGTM的標注結(jié)果有了很大的差異由于不采用補足中心原則，因此改進DGTM標注結(jié)果并不符合在補足中心原則影響下人們長期以來形成的語感。但更符合人們閱讀認知經(jīng)驗，而且可以按函數(shù)標準給出形式化地解釋，其解釋結(jié)果符合句子本身的語法和語義結(jié)構(gòu)，沒有錯誤和干擾信息。因此，改進DGTM更適合計算機處理，更符合句法標注的本來目的。
四、結(jié)語
一、 插畫在當下社會的形勢
1.1插畫的發(fā)展現(xiàn)狀
現(xiàn)今的社會經(jīng)濟發(fā)展迅猛數(shù)字化機械化發(fā)展迅速，數(shù)字化、信息化的時代來臨。同樣的，傳統(tǒng)手繪插畫藝術也進入了數(shù)字化的時代，從而產(chǎn)生了新的繪制情勢。就是本篇論文介紹的數(shù)碼繪畫藝術[1]。
1.2國外插畫的發(fā)展
在外洋，尤其以歐美、日本、韓國等發(fā)達國家為主，在藝術學校中插畫已經(jīng)被設立為一門單獨的學科，數(shù)碼繪畫藝術在歐洲和亞洲等經(jīng)濟發(fā)展比較靠前的國度中都擁有很大的市場和很好的發(fā)展前景。對插畫藝術的欣賞評鑒在社會上已經(jīng)是司空見慣了，許多的自主插畫產(chǎn)物在市場上流通出現(xiàn)，比如書籍，插圖等等。在日本，數(shù)碼繪畫插畫藝術也已經(jīng)占了市場很大的比重，現(xiàn)代的插畫家已經(jīng)普遍的運用計算機數(shù)碼繪畫技術來進行插畫的繪制[2]。
1.3國內(nèi)插畫的發(fā)展現(xiàn)狀
我國的數(shù)碼插畫藝術設計與歐美、日本、韓國等發(fā)達國家相比還是一個剛起步的狀態(tài)，好比一只嗷嗷待哺的小鷹。很多人對于數(shù)碼繪畫技術的忽視導致了CG畫師也是近年來數(shù)碼繪畫行業(yè)中的稀缺人才[3]。而在20世紀90年代末至本世紀初數(shù)碼繪畫師成為了一個受人們歡迎且神奇的職業(yè)，CG畫師的作品也更加的受到大眾的歡迎，其中比較出眾的是暴雪娛樂的一批插畫精英，其插畫作品也因為魔獸世界被大家熟知。
二、數(shù)碼繪畫技術和插畫的基本概念
2.1插畫的概念
插畫，西文統(tǒng)稱為"Illustration"，意思是"照亮"，也就是插在文字當中有助于對文字內(nèi)容理解的圖畫，也就是說插畫可以使文字變得更加的簡單易懂。插畫最先是在十九世紀初隨著傳播媒介的變遷被大家熟知的，發(fā)展到現(xiàn)在插畫被用作于各種地方，并且插畫主要是運用圖像來表達自己的思維和構(gòu)想，將自己想表達的內(nèi)容以藝術的形式表現(xiàn)出來，具有較強的藝術表現(xiàn)力。插畫同樣也是一種非常重要的視覺傳達形式，在商業(yè)活動、文化活動、電影電視文化等方面出現(xiàn)的比較多，例如：出版物；商業(yè)宣傳；影視多媒體；游戲設計等等[4]。
2.2數(shù)碼繪畫概念
我們所說的數(shù)碼插畫目前主流的軟件工具有：Photoshop、Freehand、Coreldraw、Painter、3Dmax、MAYA等。數(shù)碼繪畫技術在現(xiàn)代插畫中有一個很顯著的特點那就是對于傳統(tǒng)手繪風格的模仿與再次重現(xiàn)。其中一方面體現(xiàn)在一些特有的效果上，數(shù)碼繪畫技術對于水墨畫、水彩畫、油畫等傳統(tǒng)手繪風格中筆觸和肌理的效仿，另一方面體現(xiàn)在畫面的風格上和數(shù)碼繪畫技術對各種類型風格的效仿，類似于涂鴉類風格、唯美風格、卡通漫畫風格等。所以說數(shù)碼繪畫技術強大的效仿功能與其筆觸的多樣性的選擇是數(shù)碼繪畫技術與傳統(tǒng)手繪風格結(jié)合的優(yōu)勢，在表現(xiàn)技法上的自由度大大的提高，使得作畫更加的方便快捷。插畫師在現(xiàn)代插畫創(chuàng)作過程中使用的最多的就屬數(shù)位板了，創(chuàng)作者可以隨心所欲的使用各種材料，這些軟件提供了水彩、噴槍、蠟筆、鉛筆、油畫、等多種筆觸的效果，效果通常比較自然、隨意、保留著材料、質(zhì)感、肌理和筆觸。而且壓感筆也同樣可以模擬出人手用筆的感覺，對于筆觸的透明度和變化也可以很好的控制，并且可以輕松地創(chuàng)造出各種虛擬的效果。傳統(tǒng)手繪則使用的是顏料、畫架畫板、畫筆和各種紙張工具。數(shù)碼繪畫技術與傳統(tǒng)手繪相融合，使手繪方式發(fā)生了改變，沒有了顏料、畫筆、紙張的傳統(tǒng)繪制形式，取而代之的是以電子文件的方式呈現(xiàn)。數(shù)碼繪畫藝術以電子科技發(fā)展和一種新的傳播媒介作為基礎，將人類理性思維和藝術創(chuàng)作思維合二為一，使用電腦繪制圖像有著明快的色彩、修改起來更加簡便、保存方便快捷，不僅使得手繪的效率得到提高，同時還能使繪畫風格多樣化。插畫師開始追求和更多的重視自己個性的表達，將自己的特點放到畫面中同時也使設計師將更多地精力放在設計創(chuàng)作上，而不是將大量的時間精力放在一張畫的制作上，所以數(shù)碼繪畫技術拓展了插畫設計者的創(chuàng)作空間同樣的也提升了設計者的工作效率，也有益于將大量富有設計感的創(chuàng)作元素帶到我們的身邊[6]。
2.3數(shù)碼繪畫步驟
首先我們將插圖底稿進行處理，通常對于一幅畫的底稿處理有兩種方式，一種是作者使用紙和筆進行傳統(tǒng)方式的草圖設計勾畫素描稿，之后通過掃描的方式輸入到電腦里，接著使用Photoshop編輯處理，另一種方法就是直接使用數(shù)位板來進行草圖繪制。利用紙筆繪畫出來的線稿草圖比電腦手繪的線條更加流暢，整體的結(jié)構(gòu)更容易掌握，原因是現(xiàn)在的數(shù)位板雖然已經(jīng)擁有靈敏的壓感，但還是不能完全的模擬人手使用紙筆時的感覺，這也成為數(shù)碼產(chǎn)品接下來研究和開發(fā)的領域。接下來我們將清晰的底稿草圖使用軟件來進行上色，利用軟件特點我們可以方便的將多個元素進行合成，并且可以做到半透明圖像元素疊加，從而產(chǎn)生一種和諧的圖像效果。具體的上色步驟分別為：
鋪底色：體現(xiàn)畫面大致的色彩關系和明暗關系，我們可以采用噴槍、水彩、數(shù)字水彩等各種筆刷工具。
繪制背景：將畫面進行精細的描繪從而使物體產(chǎn)生體積感，質(zhì)感等細節(jié)，在最后對各個圖層中的元素進行色階、色調(diào)、飽和度、圖層透明度等進行調(diào)整和處理，使得這些元素完美的結(jié)合在一起，使他們之間的過渡更加自然，使得畫面可以達到傳統(tǒng)手繪插畫無法表現(xiàn)的一些復雜效果。
細節(jié)刻畫：將色彩進行仔細刻畫用來表達畫面中物體或者人物的體積感，物體或者人物在圖像中的明暗關系和色彩上的冷暖對比，一幅畫的細節(jié)不僅僅反應出作者的繪畫功底，也可以突出作品的整體特點以及畫面的趣味性。
畫面細微調(diào)整：在我們繪制完畢以后我們可以根據(jù)我們畫面的需要來調(diào)整整張畫面，包括整體畫面的色調(diào)、亮度、對比度、飽和度、圖像的裁剪等。往往可以繪制出一幅精彩的畫面。之后我們將繪制完成的插畫作品進行保存，將繪制完成的畫作、插畫文檔以及有關的資料元素保存。
三、結(jié)論
在數(shù)碼繪畫技術和傳統(tǒng)手繪方式的結(jié)合下，我們往往可以看到在現(xiàn)實生活中無法看到的空髕婊謾⒐值的奇幻的畫面，其中絕大多數(shù)都是用在現(xiàn)實中不存在的題材，加以創(chuàng)作者的靈感和想象，將明確的內(nèi)容以創(chuàng)作者玄妙的幻想表現(xiàn)出來。藝術是生命中最靈敏的感覺，它表達了自身對于整個世界的感受、印象、希望和夢想，在以后的世界里或許數(shù)字化技術將會引導我們創(chuàng)建和管理這個世界。
參考文獻
[1] 網(wǎng)站
[2] 尤勁東.《當代插圖如是說》[M].百花文藝出版社.2008（10）
[3] 李強.《主流插畫表現(xiàn)技法》[M].2010（11）
21世紀，中國的動畫教育進入到一個蓬勃發(fā)展的時期。全國各藝術類和非藝術類高校相繼開設了動畫專業(yè)。2001年全國開設動畫專業(yè)的大專院校僅三十多所，2007年則猛增到近五百所，其增長速度遠遠超過了其他新增專業(yè)，其中，藝術類高校更是擴大招生規(guī)模，以滿足動畫行業(yè)的人才需求。然而遺憾的是，由院校培養(yǎng)出來的動畫專業(yè)人才，在整個動畫行業(yè)中所占比例不到1%，畢業(yè)生改行現(xiàn)象嚴重。是什么原因造成了招生與就業(yè)的巨大反差呢？又是什么原因造成了人才需求與人才供給的不對等？筆者認為，主要原因在于教學過程中忽視了一些基礎的重要環(huán)節(jié)。
一、美術基礎教學環(huán)節(jié)被忽視的原因及對策
動畫，簡單的理解就是“運動的畫”“畫出來的電影”。“畫”字當頭，想要創(chuàng)作出好的動畫作品，需要過硬的美術基本功，許多高校的動畫教學卻忽視了這一點，主要表現(xiàn)在以下幾方面：
1.生源的美術基礎差與擇優(yōu)錄取。近年來藝術類高校的招生量激增，專業(yè)考核標準也有所降低，這有利有弊：一方面，萬千學子得以接受高等藝術教育；另一方面，動畫考生的美術基礎較差已是不爭的事實。20世紀90年代中期以前的美術考生，多數(shù)是從小就接受正規(guī)的美術教育，接受了長時間的專業(yè)訓練。這些人學習美術的目的，都是出自熱愛，而非應付高考。他們的造型能力強，美術功底比較扎實，通過層層專業(yè)加試考核進入大學，能很快地適應并完成基礎課的學習，從而轉(zhuǎn)入專業(yè)學習階段。而現(xiàn)在的動畫（包括美術類其他專業(yè)）考生中，有相當一部分是出自藝術類院校招生錄取線偏低的考慮才學習動畫的，在考前一年，甚至半年或三個月突擊學習美術，基礎和造型能力較差。由于“畫”的能力欠缺，他們構(gòu)建不了畫面內(nèi)容，無法準確造型，對他們來說“畫電影”實在太難。有的學生干脆放棄手繪方面的學習，而轉(zhuǎn)入計算機工具軟件的學習。可見，擇優(yōu)錄取、保證生源質(zhì)量，是各院校動畫專業(yè)提高學生美術造型能力的有效途徑之一。
2.教學大綱的不完善與“因地制宜”和延長學制。相當一部分新增設動畫專業(yè)的學校，忽視了自身的辦學條件和生源質(zhì)量，直接借鑒或照搬知名院校（北京電影學院、中國傳媒大學等）的動畫教學大綱。有的院校干脆沿用以往其他美術類專業(yè)的教學大綱，展開動畫基礎教學，這很難適應動畫專業(yè)自身的教學要求。此外，基礎課時量不足，如素描、速寫、色彩等主要的專業(yè)美術基礎課，大多一個學期就結(jié)課，學生原本單薄的美術基礎，沒有得到實質(zhì)性提高。筆者認為，各高校應根據(jù)自身情況制定新的教學大綱，適當加大美術基礎課時，以此提高學生美術造型能力，使之適應動畫專業(yè)的高要求。同時，為了避免基礎課與專業(yè)課的學時沖突，可以嘗試實行動畫本科教育“五年制”，比如，美術基礎課貫穿整個教學過程的同時，在保持原有一年共兩個學期美術基礎教學課時的基礎上，增加一年共四個學期的基礎教學課時。動畫專業(yè)是同屬于美術范疇和電影范疇的，學生要在四年內(nèi)學習和掌握大量的基礎與專業(yè)知識并不容易，而“五年制”對于動畫這樣一個專業(yè)性強的學科來說，能夠很好解決教學大綱中基礎課時不足的問題。
3.疏于基礎理論課教學與鞏固理論課程，增設選修課。許多院校在制訂教學計劃時過分強調(diào)動畫專業(yè)的專業(yè)性，為保證專業(yè)教學的課時，刪減了一些看似與本專業(yè)無關的基礎理論課程，如藝術概論、美術史、電影史等基礎課程。教育的目的是培養(yǎng)人才，高校動畫教育的目的是要培養(yǎng)一專多能的復合型動畫藝術人才。走向社會的他們不僅僅要面對激烈的產(chǎn)業(yè)和市場競爭，同時還肩負著振興中國動畫的歷史使命。中國動畫要振興，真正需要的不是“輕藝重技”的產(chǎn)業(yè)工人，而是有著深厚文化藝術底蘊的動畫人才。李政道將科學與藝術比做一個硬幣的兩面。動畫教學過程中，技術與藝術孰重孰輕的問題，已經(jīng)無需探討。但如何在動畫教學中讓學生突破技術瓶頸，將技術與藝術有機地融合，是動畫教育界應解決的問題。根本的解決辦法就是讓學生了解動畫之道，明白動畫的創(chuàng)新之道。因此，動畫基礎教學，不僅要加強鞏固原有基礎理論課程，還要適當增設與動畫藝術有關的選修課程，如音樂賞析、中外建筑史等理論課程。這些知識的學習與涉獵，對提高學生的藝術修養(yǎng)大有益處。
4.過于強調(diào)高技術手段應用與重視傳統(tǒng)教學方式。CG是英文COMPUTERGRAPHICS 的縮寫，是指計算機圖形藝術，三維CG技術突破了傳統(tǒng)二維動畫的技術局限，動畫畫面變得立體，攝影角度豐富，可視性也大大增強。各院校都加大了動畫三維軟件的教學力度，這固然是對的，但有些院校盲目的以CG、多媒體，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的動畫教學內(nèi)容，就比較偏激了。一個美術基礎薄弱、造型能力較差的人，很難用軟件塑造出一個活生生準確的人物形象，同樣，一個不具備色彩寫生能力的人，也無法將三維建模的背景，變?yōu)樯使饩€準確、符合劇本時空要求的動畫場景。沒有二維動畫的扎實基礎，是做不出高質(zhì)量的三維動畫影片的。因此，高校在加大三維CG技術學習力度，以適應市場需要的同時，一定要鞏固二維動畫基礎知識的學習。
二、影視基礎教學環(huán)節(jié)被忽視的原因及對策
動畫是畫出來的電影，其中，“動畫”是過程和手段，“電影”是目的和結(jié)果。動畫作品不論長短，最終呈獻給觀眾的是一部影片。電影是運動著的時空聲畫藝術，在動畫教學過程中，對電影知識中“運動”“時空”“聲畫”的研究與學習，就變得尤為重要了。然而，目前不少高校對影視基礎教學的認識還存在誤區(qū)，影視教學的師資也比較薄弱。
1.對影視基礎知識教學的認識存在誤區(qū)。目前，很多開設動畫專業(yè)的院校，認為動畫是動畫，電影是電影。學習動畫，就應該把全部精力放到“畫”上面來，一些影視基礎課淪為選修課，或是干脆被剔除出教學計劃。這種錯誤的做法，將直接影響學生將來的畢業(yè)設計。畢業(yè)設計是動畫專業(yè)學生，在完成全部專業(yè)課程學習的基礎上進行的最后一個實踐性教學環(huán)節(jié)，是學生自主運用所學知識和技能做一部動畫影片，以接受學校、家長以及社會用人單位的檢驗。如何將成千上萬張動畫剪輯組合成一部完整的影片，這需要足夠的影視知識和技術。畫動畫是先決條件，但光會畫畫是遠遠不夠的。沒有豐富的影視知識，無法創(chuàng)作出一部分鏡頭到位、聲畫完美、剪輯順暢、敘事準確完整的影片。影視基礎教學中的電影語言語法、電影的音響與音效，主要研究的就是構(gòu)成動畫電影聲、畫這兩個要素，而電影的分鏡頭設計和剪輯原理，是保證動畫電影敘事順暢準確所必修的兩門課程。所以，高校的動畫專業(yè)，在“畫”與“電影”關系的認識上要清醒，加強影視基礎課程的教學力度，切不可顧此失彼。
2.高校影視基礎教學的師資不足。新設動畫專業(yè)院校的專業(yè)教師，大都是來自動畫產(chǎn)業(yè)的技術人員和過去從事過美術教學的教師。他們自身影視知識的相對匱乏，也是導致影視基礎教學被忽視、教學效果不佳的原因之一。深圳、上海等地，許多大動畫公司只做外加工片，不進行原創(chuàng)，所有動畫的行為，僅限于原動畫加工與上色的工序，這使從產(chǎn)業(yè)來的教師，很難接觸到動畫腳本、分鏡頭設計等關鍵的動畫創(chuàng)作過程，影視知識當然匱乏。而從美術相關專業(yè)改行而來的教師，由于美術思維占據(jù)主導，容易在主觀上強化美術意識而淡化電影意識。所以，高校應針對動畫專業(yè)教師開展影視知識培訓，多派教師外出進修。動畫專業(yè)教師也應該不斷進行自學，使自己的業(yè)務能力再上一個新的臺階。只有這樣，影視基礎的教學效果才能有所提高。
三、結(jié)語
中國動畫產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，人才培養(yǎng)是關鍵。培養(yǎng) “一專多能的復合型動畫藝術人才”，是我國動畫教育的當務之急。千里之行，始于足下，開設了動畫專業(yè)的高校，要從基礎教學環(huán)節(jié)入手，重視每一個教學環(huán)節(jié)，逐步完善動畫基礎教學體系與課程設置，牢記師責，為振興中國動畫邁出我們堅實的一步。
中圖分類號：S852.67 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）04-0949-04
Cloning and Expression of Major Outer Membrane Protein of Chlamydophila Clinical Strain HB1043 from Swine
YAN Shao-xia1，2，TIAN Yong-xiang1，LIU Ze-wen1，YUAN Fang-yan1，GUO Rui1，DUAN Zheng-ying1，
YANG Ke-li1，MENG li1，ZHOU Dan-na1，LI Shao-wen2
（1. Institute of Animal Husbandry and Veterinary， Hubei Academy of Agricultural Sciences， Wuhan 430064，China； 2. College of Animal Science and Technology， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070，China）
Abstract： Chlamydophila was an obligate intracecullar parasites and could infect human and multiple animals. According to the published complete nucleotide sequence of Chlamydophila major outer membrane protein （MOMP） in the GenBank and the whole genome of Chlamydophila isolated from clinical samples， the whole genome sequence of MOMP gene were obtained by PCR. The PCR product was sequenced and blasted with the committed MOMP sequence （EU531729） from strain CG1 of swine Chiamydophila abortus. The results showed that it had one base different from the CG1 strain. The extinction enzymes sites BamHⅠand SalⅠwere selected for cloning the MOMP sequence to the pET-28a. The restructuring plasmid pET-28α-MOMP were then transfered into E. coli BL21 and expressed. The target protein rMOMP was purified by the Ni Sepharose 6 Fast Flow and proved with immunocompetence by Western-blot.
Key words： Chlamydophila； major outer membrane protein； recombined expression
衣原體是一類細胞內(nèi)專性寄生的、大小介于細菌和病毒之間的革蘭氏陰性微生物。衣原體感染在世界范圍內(nèi)均有流行，是一種能夠引起人和動物患病的人畜共患病原體。依據(jù)衣原體核糖體rRNA的序列比對以及多態(tài)性限制性酶切位點的分析，將衣原體科分為衣原體屬和嗜性衣原體屬。
嗜性衣原體屬包含鸚鵡熱嗜性衣原體、流產(chǎn)嗜性衣原體、肺炎嗜性衣原體、家畜嗜性衣原體、貓嗜性衣原體以及豚鼠嗜性衣原體[1]。其中，危害最大的病原體主要是流產(chǎn)嗜性衣原體和鸚鵡熱嗜性衣原體。流產(chǎn)嗜性衣原體是從鸚鵡熱嗜性衣原體中衍生出來的一個新成員，這兩種病原體都可以感染豬、綿羊、山羊、牛等哺乳動物，同時作為一種人畜共患的病原體，經(jīng)常與感染動物接觸的人可經(jīng)呼吸道傳播的途徑發(fā)生感染。人類感染后主要表現(xiàn)為類似流感的病癥，嚴重時可引起心內(nèi)膜炎、腦炎、肺炎、流產(chǎn)甚至死亡[2]。
近些年來，研究者對衣原體的基因組學以及蛋白質(zhì)組學進行了深入的研究，但是針對衣原體病的診斷目前尚沒有十分成功的試劑盒得以推廣應用。根據(jù)以往的研究報道，作為研究熱點的診斷抗原蛋白有主要外膜蛋白（MOMP）、多型性外膜蛋白（POMPs）、熱休克蛋白（HSP）以及脂多糖（LPS）等。其中40 ku的衣原體MOMP占衣原體外膜蛋白的60%以上，具有血清型、亞種、種和屬特異性抗原決定簇，是衣原體病診斷的主要研究抗原[3]。有研究者對流產(chǎn)嗜性衣原體的CP/12株的MOMP、E型沙眼衣原體的MOMP以及雞源鸚鵡熱衣原體的MOMP全長基因進行了克隆表達[4-6]。
本試驗所用的病原為臨床分離病原，是經(jīng)特異性引物進行PCR鑒定后的衣原體。經(jīng)雞胚攻毒試驗證明其具有很強的致死性，致死的雞胚病理變化與以往研究報道相符。同時，實驗室對該病原體的16 S/23 S/16-23 S rRNA進行擴增并經(jīng)分析鑒定其屬于嗜性衣原體屬。在系統(tǒng)進化樹中，其與鸚鵡熱嗜性衣原體和流產(chǎn)嗜性衣原體親緣關系較近，共用一個節(jié)點，但不與鸚鵡熱嗜性衣原體和流產(chǎn)嗜性衣原體共枝[7]。鑒于該株嗜性衣原體具有很強的致病致死性，本試驗對其主要外膜蛋白進行選擇性原核表達，并驗證其免疫學活性，以期為下一步開發(fā)豬的衣原體病診斷試劑盒打下理論基礎。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
豬源衣原體HB1043株表達載體pET-28a、感受態(tài)細胞Escherichia coli DH5α、E. coli BL21由湖北省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所獸醫(yī)室保存；限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和SalⅠ、T4 DNA連接酶、DNA Marker以及PCR反應試劑等均購自寶生物工程（大連）有限公司；HRP標記的羊抗豬購自SoutherBiotech；豬衣原體陽性血清為本室衣原體IHA試劑盒（購自湖北省畜牧獸醫(yī)局）檢測呈陽性的豬血清；AxyPrep凝膠回收試劑盒購自杭州愛思進生物技術有限公司。
1.2 試驗方法
1.2.1 引物設計 根據(jù)GenBank中MOMP全基因序列設計特異性引物上游P1：TTAGGATCCATGAA
AAAACTCTTGAAATCG，前加酶切位點BamHⅠ；下游P2：GCGGTCGACTTAGAATCTGAATTGAGC，前加酶切位點SalⅠ。引物由生工生物工程（上海）技術服務有限公司合成。
1.2.2 目的基因擴增 使用Biospin細菌基因組DNA提取試劑盒（Bioer Technology co. Ltd，BSC12S1）提取衣原體基因組。取適量臨床分離株接毒致死的雞胚卵黃囊液于1.5 mL離心管中，3 000 r/min離心10 min，取上清液，再15 000 r/min離心30 min，棄上清液，按照試劑盒操作步驟提取基因組。以提取的衣原體全基因組DNA為模板，特異性的引物P1、P2為引物進行PCR反應，反應程序為94 ℃預變性2 min；94 ℃變性15 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30個循環(huán)；72 ℃ 10 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。采用AxyPrep凝膠回收試劑盒（杭州愛思進生物技術有限公司，AP-GX-50）對PCR產(chǎn)物進行回收，測序。
1.2.3 MOMP基因序列及蛋白特性分析 使用DNAStar、SignalP 3.0 Server等軟件對測序結(jié)果進行分析，并與GenBank中衣原體的MOMP序列進行同源性分析。
1.2.4 構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-MOMP 根據(jù)分析結(jié)果，選用BamHⅠ和SalⅠ對PCR產(chǎn)物及質(zhì)粒pET-28a進行雙酶切。經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，采用DNA Fragment Purification Kit ver.2.0（寶生物工程（大連）有限公司，DV807A）對酶切產(chǎn)物進行回收。
將帶有黏性末端的酶切產(chǎn)物使用T4 DNA連接酶反應體系連接。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞E.coli DH5α，轉(zhuǎn)化方法按常規(guī)轉(zhuǎn)化步驟進行。篩選出陽性克隆后小量搖菌，使用E.Z.N.A.Plasmid Midi Kit Ⅰ（Omega Bio-Tek，D6944-01）試劑盒提取質(zhì)粒。提取的質(zhì)粒經(jīng)PCR及酶切鑒定，以確定目的片段正確克隆入載體，重組載體命名為pET-28a-MOMP。
1.2.5 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 上一步中構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pET-28a-MOMP轉(zhuǎn)化表達載體E. coli BL21。按常規(guī)轉(zhuǎn)化方法進行。
1.2.6 誘導表達 將上一步中轉(zhuǎn)化成功的表達菌E. coli BL21接種LB培養(yǎng)基進行誘導表達，同時設置對照組：含空質(zhì)粒pET-28a的E. coli BL21組。具體操作見文獻[8]。
采用SDS-PAGE凝膠配制試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司，AR0138）檢測蛋白質(zhì)表達情況。誘導表達過程中所取的樣品均按照常規(guī)方法處理。按試劑盒使用說明配膠，上樣各20 μL，同時加Protein Marker。80 V，40 min后120 V至電泳完成。電泳完畢后進行考馬斯亮藍染色，觀察蛋白表達情況。
1.2.7 rMOMP純化 重新誘導表達重組蛋白rMOMP。具體操作見文獻[8]。
使用Ni Sepharose 6 Fast Flow親和層析柱除去雜蛋白。具體步驟按使用說明書進行。最后洗脫時采用咪唑濃度梯度洗脫，咪唑濃度分別為100、200、300 mmol/L的洗脫液洗脫目的蛋白；洗脫完成后加復性劑使重組蛋白復性；最后使用蔗糖濃縮蛋白液濃縮；收集蛋白，1.5 mL離心管分裝，-70 ℃保存。其中每個步驟取樣待檢。
SDS-PAGE電泳檢測蛋白表達及純化情況，拍照。
1.2.8 rMOMP活性檢測 重新誘導表達，SDS-PAGE電泳結(jié)束后切膠進行Western-blot檢測其免疫學活性，同時做陰性對照，具體操作見文獻[8]。其中陽性組和陰性組所用一抗為經(jīng)IHA試劑盒檢測確定的陽性血清及陰性血清。觀察結(jié)果并拍照。
2 結(jié)果與分析
2.1 測序結(jié)果及分析
使用DNAStar對MOMP測序結(jié)果分析顯示，擴增得到的MOMP序列全長為1 176 bp，編碼的蛋白質(zhì)為391個氨基酸，分子質(zhì)量約為42.4 ku。由Protean軟件分析其表面抗原位點如圖1所示。從圖中可看出第20-90位氨基酸殘基之間的區(qū)段雖然抗原性位點較強但是其可能不是表面抗原位點，而在100位、240位以及345位氨基酸殘基處抗原性較強，而且均可能為表面抗原位點。
測序結(jié)果經(jīng)BLAST比對顯示，擴增的MOMP與GenBank中流產(chǎn)嗜性衣原體CG1株的MOMP全序列（EU531729）有1個堿基不同，而且此位點突變后CG1株中原有的限制性內(nèi)切酶位點MsⅡ消失；與鸚鵡熱嗜性衣原體C1/97株以及GD株有3個堿基位點不同。
SignalP 3.0 Server分析結(jié)果如圖2，全部391個氨基酸殘基中最有可能為信號肽的是前22個氨基酸殘基。
對序列進行限制性酶切位點分析，在271 bp處為限制性內(nèi)切酶BamHⅠ位點，而且經(jīng)此酶切位點切割后后續(xù)堿基序列的讀碼框并未受到影響。結(jié)合前面的分析結(jié)果，將此限制性內(nèi)切酶位點前的序列切除，對后面部分進行選擇性表達。
2.2 PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果
以提取的衣原體全基因組為模板，特異性引物P1、P2為引物PCR擴增目的蛋白MOMP的全基因片段，其產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳如圖3所示。從圖中可以清晰地找到目的條帶，大小在1 200 bp左右，與預期大小相符，說明PCR得到了MOMP的全基因片段。
2.3 SDS-PAGE檢測結(jié)果
蛋白純化過程中收集的各階段樣品進行SDS-PAGE電泳檢測結(jié)果如圖4。由圖4可知，含有空載體pET-28a的BL21組在誘導前后的蛋白表達情況基本上沒有不同，只是蛋白量的多少不同；而含有pET-28a-MOMP重組載體的BL21組在經(jīng)加入誘導劑IPTG后在42.4 ku大小處可以明顯觀察到有新的蛋白產(chǎn)生，其大小與目的蛋白rMOMP的預測大小一致，說明目的蛋白得到很好的表達；菌體經(jīng)超聲破碎后的上清中沒有目的蛋白，說明目的蛋白是以包涵體沉淀的形式存在的；3個不同咪唑濃度的洗脫液電泳結(jié)果說明咪唑濃度在100 mmol/L時為最佳的洗脫條件；濃縮后的蛋白樣品電泳結(jié)果說明經(jīng)過純化，蛋白溶液中的雜蛋白基本上被除去。
2.4 rMOMP活性檢測結(jié)果
對純化得到的rMOMP進行Western-blot試驗，結(jié)果如圖5。由圖5可知，rMOMP與豬衣原體的陽性血清發(fā)生了反應，而與陰性血清不反應，說明得到的蛋白具有免疫學活性。
3 小結(jié)與討論
衣原體的外膜結(jié)構(gòu)與其他革蘭氏陰性菌不同，其缺乏肽聚糖成分，由脂多糖代替。整個分子的穩(wěn)定性由40 ku的主要外膜蛋白（MOMP）、富含半胱氨酸的60 ku的大蛋白和12 ku的小蛋白通過廣泛的二硫鍵結(jié)合形成網(wǎng)絡狀來維持。分子生物學研究表明MOMP是一種膜孔類蛋白，其結(jié)構(gòu)類似于大腸桿菌的OmpF和PhoE通過疏水性和靜電力結(jié)合形成的三聚體。MOMP的這個三聚體結(jié)構(gòu)是由3個MOMP單體構(gòu)成，在單體內(nèi)部及單體之間存在廣泛的二硫鍵[9]。Rodriguez-Maranon構(gòu)建的MOMP分子模型中，MOMP單體是由16個反向平行的β-卷曲形成的圓桶狀的分子通道結(jié)構(gòu)。MOMP的4個VD區(qū)則位于桶狀結(jié)構(gòu)的外表面，與EB的黏附及進入真核細胞有直接的關系[10]。許多研究資料均表明，MOMP具有很強的抗原活性而且是制備衣原體疫苗最佳的候選單位[11，12]。
信號肽在蛋白外源表達過程中對蛋白的產(chǎn)率、降解以及產(chǎn)物加工復性等都有很大的影響[13]。該試驗對臨床分離的衣原體MOMP全基因片段進行了擴增、測序以及序列分析。分析結(jié)果顯示，此株衣原體與已報道的CG1株流產(chǎn)嗜性衣原體的MOMP序列有一個堿基突變，而該位點突變后，CG1株中原有的限制性內(nèi)切酶位點MsⅡ消失，關于該酶切位點的有無對MOMP性質(zhì)的影響有待進一步研究分析。同時根據(jù)序列分析結(jié)果將限制性內(nèi)切酶位點BamHⅠ之前部分序列切除后進行了誘導表達。表達產(chǎn)物經(jīng)純化后通過Western Blot檢測其免疫學活性，結(jié)果證明試驗中所得到的蛋白仍然具有免疫學活性。關于該株衣原體的MOMP可否作為診斷抗原并進一步開發(fā)豬衣原體病的檢測試劑盒等問題將在后續(xù)試驗中加以論證。同時該試驗結(jié)果也為衣原體基因工程疫苗的研究提供了理論參考。
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