序論：速發(fā)表網(wǎng)結(jié)合其深厚的文秘經(jīng)驗(yàn)，特別為您篩選了11篇大一學(xué)習(xí)計(jì)劃書范文。如果您需要更多原創(chuàng)資料，歡迎隨時與我們的客服老師聯(lián)系，希望您能從中汲取靈感和知識！

篇1

我們學(xué)生會的就是為大家提供服務(wù)的，為了更好的服務(wù)于每一位同學(xué)，為了更好的完成辦公室的每一項(xiàng)任務(wù)，為了讓自己的大學(xué)生活過得更充實(shí)更加有意義，為了以后更好的服務(wù)社會，為了適應(yīng)這個充滿競爭的社會，我將踐行“爭取想做的，做到該做的，做好在做的”這一座右銘，對自己嚴(yán)格要求，認(rèn)認(rèn)真真，踏踏實(shí)實(shí)的完成領(lǐng)導(dǎo)交給的每一項(xiàng)任務(wù)。經(jīng)過接下來的努力學(xué)習(xí)及工作生活總結(jié)，努力使自己成為一名優(yōu)秀的學(xué)生會辦公室委員。

二 主要工作任務(wù)

1、對每周一次的例會做好通知、記錄，做好上傳下達(dá)的工作，并且落實(shí)例會的決定

2、多學(xué)、多看、多思，多悟，在例會中有不懂的地方，及時請教主任和同事。

3、在課余時間，積極主動地到辦公室，輔助老師的工作，做一些力所能及的事情，認(rèn)真履行自己的職責(zé)。

4、 協(xié)助各部門開展工作，協(xié)調(diào)部門之間的關(guān)系。

5、定期了解各部門工作進(jìn)程，期末交學(xué)生會主席團(tuán)，由此形成學(xué)生會工作總結(jié)，并以此作為部門考核內(nèi)容之一。

6、負(fù)責(zé)文件處理。接收、傳閱、督辦上級團(tuán)，學(xué)習(xí)組織文件、外來信函材料等;起草、印發(fā)學(xué)生會文件、總結(jié)匯報(bào)材料和對外信函等;做好文件管理、檔案(含電子檔案)和信息工作，對檔案資料等文件，做到不遺失，查閱方便、迅速。

7、認(rèn)真完成主席團(tuán)交給的其它工作任務(wù)。

8、對辦公室的重新布置與美化，處理辦公室日常事務(wù)。

9、及時申請系團(tuán)委學(xué)生會的辦公用品，并且在最短時間內(nèi)發(fā)放到各部。

10、對每次活動進(jìn)行考勤，建立起一套完整的檔案管理機(jī)制，建立起每個學(xué)生會部門、每個干事的考勤檔案制度，確保學(xué)生會的各項(xiàng)評優(yōu)、評獎活動有據(jù)可依。

11、對系團(tuán)委學(xué)生會內(nèi)部成員的檔案管理將進(jìn)行調(diào)整。

12、收集各部門的工作計(jì)劃與工作總結(jié)，交于團(tuán)委老師，審查后存檔。

13、妥善保管好各部門、各項(xiàng)活動的計(jì)劃、總結(jié)以及相關(guān)系團(tuán)委學(xué)生會的所有資料，做好期末存檔工作。

14、做好學(xué)生會各項(xiàng)活動的記錄。

三常規(guī)工作

1：在工作的過程中，在做好我們的基本職能的前提下，我們應(yīng)該更堅(jiān)守我們的原則，規(guī)范自身，以身作則，認(rèn)真的對待工作，我們需要加強(qiáng)仔細(xì)程度，及時上傳下達(dá)，將信息傳遞給每個人，這是我們的工作與責(zé)任。

2：在辦公室舉行的活動中，我們需要具體動作創(chuàng)新，在保持傳統(tǒng)活動精神的前提下，對活動的內(nèi)容、形式、運(yùn)作要有所創(chuàng)新，有所突破，很多活動如果再這樣發(fā)展下去將毫無生命力，每個活動都包括前、中、后三個階段：前期活動的策劃;中期活動的舉行，后期活動的總結(jié)。在活動前期一定要認(rèn)真的做好詳細(xì)的活動調(diào)查，調(diào)查對象主要包括校內(nèi)大學(xué)生、學(xué)校黨政機(jī)關(guān)和校外社會企業(yè)，并對活動的可行性進(jìn)行評估分析。抓好活動精髓，提高活動立意，在我們本著為同學(xué)們創(chuàng)造學(xué)習(xí)環(huán)境、建設(shè)鍛煉平臺，提供表現(xiàn)機(jī)會的同時，更有必要在活動精髓及活動立意深思熟慮。要真正做到舉辦活動有意義，有收獲，體現(xiàn)廣大學(xué)生的需求，實(shí)實(shí)在在的為同學(xué)們提供服務(wù)，體現(xiàn)活動真正的價值，總而言之，價值體現(xiàn)在需求。整合現(xiàn)有資源的同時，可以根據(jù)實(shí)際情況，擴(kuò)大活動規(guī)模，提高活動的意義。

四、學(xué)習(xí)管理理念

1、社會高速發(fā)展，為了趕上發(fā)展，學(xué)校管理制度也在迅速發(fā)展。所以作為系學(xué)生會咽喉部門的辦公室會本著“一切服務(wù)于學(xué)生”為宗旨，做到快速的服務(wù)，確保學(xué)生工作的順利進(jìn)行。

2、“友情是人生的一次寶貴的財(cái)富”它將使我們的工作更加順利，使我們之間更加團(tuán)結(jié)和統(tǒng)一。

篇2

主辦單位：**師范大學(xué)團(tuán)委

承辦單位：**師范大學(xué)青年志愿者指導(dǎo)中心

活動主題：用筆尖肆意揮灑，盡顯當(dāng)代大學(xué)生風(fēng)采

活動目的：通過征文的形式，為熱愛文學(xué)的同學(xué)們提供一個學(xué)習(xí)交流、展現(xiàn)自我風(fēng)采的大舞臺，讓自信青春的同學(xué)們來傳播精彩。

活動準(zhǔn)備：

1、宣傳部聯(lián)系校廣播站、師大報(bào)、傳播人等校內(nèi)影響力較大的媒體，協(xié)助我們共同宣傳此次征文活動。

2、下發(fā)“‘托起夢想，激揚(yáng)青春’系列征文比賽”文件給各個學(xué)院，由班級宣傳委員通知到每位同學(xué)。

活動排期：

獎項(xiàng)設(shè)置：

獎品設(shè)置：

1、所有獎項(xiàng)均有獎狀，金、銀、銅獎全場大獎均有獎金，優(yōu)秀獎均有紀(jì)念品。

2、金獎獎金300元、銀獎獎金200元、銅獎獎金100元。

注獎勵辦法依據(jù)本期策略單，若有調(diào)整，解釋權(quán)歸廣告社所有。

注意事項(xiàng)：

1、參賽作品必須原創(chuàng)，不得抄襲，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)抄襲現(xiàn)象，立即取消比賽資格，并在學(xué)校內(nèi)通告批評。

3、所有參賽作品概不退還。主辦單位有權(quán)對參賽作品巡展、結(jié)集出版、。

4、最后附有報(bào)名表。

活動經(jīng)費(fèi)預(yù)算：

獎金：1000元

紀(jì)念品：50元

獎狀：10元

總計(jì)：1060元。

**師范大學(xué)青年志愿者指導(dǎo)中心策劃部

附二心理咨詢活動策劃

活動時間：11月16日至11月18日

活動地點(diǎn)：青年文化廣場

活動對象：**師大在校大學(xué)生

主辦單位：**師范大學(xué)團(tuán)委

承辦單位：**師范大學(xué)青年志愿者指導(dǎo)中心

活動背景：

篇3

文章編號：1009-5519（2008）07-0954-03 中圖分類號：R33 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

Study of soybean isoflavones on antioxidative effect and improving the ability of study and memory in climacteric rats

WANG Ai-mei1，ZHOU Jian-hui2，OUYANG Jing-ping1

（1.Medical College of Wuhan University，Hubei 430000，China；2.Nanyang Medical College of Henan，Henan 473058，China）

【Abstract】Objective：To investigate the influence of soybean isoflavones on the antioxidative effect and improving the ability of study and memory in climacteric rats.Methods：Forty-eight female SD climacteric rats were randomly divided into 4 groups with one control group and the other low，medium and high dose groups，which were given soybean isoflavones 0 mg/kg.bw，42 mg/kg.bw，83 mg/kg.bw and 249 mg/kg.bw by superalimentation daily for 60 days respectively.The levels of SOD，GSH-Px and MDA in serum were measured，and the ability of study and memory in each group was deterimined by adopting the law of diving platform.Results：The content of serum MDA in medium and high dose groups was lower than that in control group.The activity of serum GSH-Px im medium and high dose groups was significantly increased，so was the activity of serum SOD in low，medium and high dose groups.Conclusion：Soybean isoflavones do have the obvious effect of antioxidation，and improve the ability of study and memory effectively in female SD climacteric rats.

【Key words】Soybean isoflavon；Climacteric rat；Antioxidation；Study and memory

近年來國內(nèi)外對大豆成分進(jìn)行了廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)大豆皂甙具有抗氧化、降血脂等作用[1，2]；大豆異黃酮能有效預(yù)防癌癥、骨質(zhì)疏松等多種疾病的發(fā)生[3]。大豆異黃酮對更年期雌性大鼠抗氧化作用及學(xué)習(xí)記憶的影響少見報(bào)道，本研究采用更年期雌性大鼠，觀察大豆異黃酮的抗氧化作用及對學(xué)習(xí)記憶能力的影響，為進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 樣品：大豆異黃酮由西施蘭聯(lián)合企業(yè)有限公司生產(chǎn)、送檢，樣品為淡黃色粉末，膠囊，鋁塑板裝0.5 g/粒，每日1粒，按60kg體重計(jì)人體推薦量為8. 3 mg/(d?kg)，取膠囊內(nèi)容物為樣品受試物。

1.2 試驗(yàn)動物及飼料：清潔級雌性SD大鼠48只，12月齡，體重300～500 g由河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供（合格證號：4104035）；清潔級飼料由河南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供（合格證號：4104042）。

1.3 主要試劑及儀器：SOD、MDA、GSH-PX試劑盒由南京建成生物工程研究所提供、美國產(chǎn)SPACE全自動生化分析儀、大鼠跳臺系中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制。

1.4 動物分組及劑量設(shè)計(jì)

1.4.1 劑量：根據(jù)大鼠血清中丙二醛(MDA)的含量的多少隨機(jī)將更年期雌性SD大鼠分為分成4組，分別為空白對照組，低、中、高劑量3個實(shí)驗(yàn)組。低、中、高3個劑量組，分別為人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即42 mg/kg、83 mg/kg、249 mg/kg，受試物采用灌胃法給予，分別取樣品42 mg、83 mg、249 mg加蒸餾水至100 ml作為低劑量組、中劑量組和高劑量組的灌胃液。另設(shè)1個對照組僅給予蒸餾水，連續(xù)給予受試物2個月，灌胃量為l0ml/kg。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法和觀察指標(biāo)：連續(xù)給予大鼠受試物2個月后，采血并分離血清，測定MDA含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－PX)的活力。

1.6 大鼠學(xué)習(xí)記憶能力測定（跳臺法）：跳臺裝置為80 cm×16 cm×40 cm的被動回避反應(yīng)箱，箱底鋪有銅柵作為刺激電極，內(nèi)設(shè)高4.5 cm，直徑6.5 cm的橡皮墊作為大鼠回避電擊的安全平臺。先放入大鼠適應(yīng)5 min，隨后通以36 V交流電，大鼠遭到電擊后跳上安全平臺，如從臺上跳下，雙足接觸銅柵為錯誤反應(yīng)，記錄3 min內(nèi)出現(xiàn)的錯誤反應(yīng)數(shù)，作為學(xué)習(xí)測試成績，24 h后重復(fù)上述試驗(yàn)，記錄每只大鼠第一次跳下安全區(qū)的時間(潛伏期) 和錯誤次數(shù)，作為記憶測試成績。

1．7 數(shù)據(jù)處理：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，采用t檢驗(yàn)判定組間差別。

2 結(jié)果

2.1 大豆異黃酮對大鼠體重的影響，見表1。

由表1可見，各劑量組大鼠在實(shí)驗(yàn)初期、中期和最后的體重分別與對照組比較，差異無顯著意義(P>0.05)。說明大豆異黃酮在本試驗(yàn)條件下對動物的體重?zé)o明顯影響。

2.2 大豆異黃酮對大鼠抗氧化作用的影響，見表2。

由表2可見，3個劑量組血清中的MDA含量均低于對照組，低、中、高劑量組與對照組比較差異有顯著意義(P

2.3 大豆異黃酮對大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，見表3。

由表3可見，在跳臺實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶測試中，低、中、高劑量組與對照組比較均能使更年期雌性大鼠的潛伏期延長，錯誤次數(shù)減少(P

3 討論

自由基是指含有未配對電子的原子、分子或基團(tuán)，由于自由基中含有未成對電子、具有強(qiáng)烈的配對傾向、高度活躍、很不穩(wěn)定，具有極強(qiáng)的攻擊性和破壞性。在正常情況下，體內(nèi)不斷產(chǎn)生自由基，但并未對身體造成嚴(yán)重后果，原因是機(jī)體的氧化和抗氧化系統(tǒng)存在著一種動態(tài)平衡。當(dāng)機(jī)體受到損傷時，體內(nèi)活性氧自由基增多，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)加??；當(dāng)體內(nèi)抗氧化能力增強(qiáng)，抗氧化酶活性增高時，可阻止脂質(zhì)過氧化或降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的含量。正常機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的抗氧化酶類有SOD、GSH-Px等，SOD能將組織細(xì)胞中的超氧陰離子自由基歧化生成過氧化氫，從而減少氧自由基對細(xì)胞的損傷； GSH-Px是機(jī)體存在的一種含硒清除自由基和抑制自由基反應(yīng)的酶系統(tǒng)，可將過氧化氫分解，并可清除 MDA和其它過氧化產(chǎn)物，阻止體內(nèi)自由基引起的膜脂質(zhì)過氧化。體內(nèi)大量活性氧自由基若不能及時清除，使活性氧水平發(fā)生改變，可促發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物（如MDA）可損傷組織細(xì)胞的膜性結(jié)構(gòu)，影響膜的功能，從而導(dǎo)致組織細(xì)胞功能的損傷，作為脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，MDA能直接反映體內(nèi)自由基損傷情況[4]。現(xiàn)已明確許多疾病或癥狀，如腫瘤、炎癥、心腦缺血、動脈粥樣硬化等，都與自由基有關(guān)[5]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示: 大豆異黃酮明顯降低更年期雌性大鼠血清MDA含量，提高血清SOD和GSH－PX活性， 并有效提高更年期雌性大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。提示大豆異黃酮能促進(jìn)機(jī)體內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)的產(chǎn)生，抑制MDA生成，具有明顯的抗氧化作用。其抗氧化機(jī)制主要通過清除活性氧自由基，阻止脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，提高抗氧化酶活性而發(fā)揮抗氧化作用。

更年期婦女隨著卵巢功能的衰退、促性腺水平紊亂以及雌激素水平下降，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化作用增強(qiáng)，自由基清除酶活性下降從而引起心血管疾病、老年癡呆等一系列的疾病[6]。更年期女性因雌激素水平低下而引起的一系列癥狀過去用傳統(tǒng)的雌激素替代療法（ERT）來治療，但ERT會增加患雌激素相關(guān)疾病、特別是乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)[7]。大豆異黃酮是從大豆中提取一種天然植物雌激素，具有天然性和安全性，既可替代合成雌激素，又能避免因長期服用合成雌激素而導(dǎo)致的多種不良作用，因此大豆異黃酮一定具有良好的應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)：

[1] Aoki H，Otake Y，Igaraquat K，et al.Soy protein reducesparaquat induced oxidative stress in rats[J].J Nutr，2002，132(8): 2258.

[2] Yamakoshi J，Izumi T.Isoflavone aglycone-rich extract withoutsoy protein attenuates atherosclerosis development in cholesterol-fed rab-bits[J].J Nutr，2000，130(8)：1887.

[3] 劉 麗，金 宏.大豆異黃酮抗氧化作用的研究進(jìn)展[J].中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2003，23(2):132.

[4] 李國莉.大豆異黃酮抗氧化效能的研究[J].食品科學(xué)，2005，26（10）：211.

[5] 鄭靈芝，李素霞，袁勤生.大豆異黃酮抗氧化性質(zhì)的研究[J].食品與藥品，2006，8（2）：48.

篇4

在我國能源發(fā)展“十一五”規(guī)劃中明確指出，要優(yōu)化發(fā)展火電，具有更高參數(shù)、更高效率的超臨界、超超臨界機(jī)組如雨后春筍一般發(fā)展開來，依據(jù)電力行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《火力發(fā)電廠鍋爐化學(xué)清洗導(dǎo)則》（DL/T794-2012）的相關(guān)要求，這些鍋爐在基建時及運(yùn)行一定年限后都應(yīng)進(jìn)行化學(xué)清洗。文章將介紹鍋爐化學(xué)清洗的必要性，并重點(diǎn)闡述大容量、高參數(shù)機(jī)組鍋爐化學(xué)清洗中應(yīng)該注意的幾個問題，提升化學(xué)清洗質(zhì)量。

1 鍋爐化學(xué)清洗的目的和必要性

鍋爐的化學(xué)清洗，就是用某些化學(xué)藥品的水溶液來清除鍋爐水汽系統(tǒng)中的各種沉積物，并使金屬表面形成一層良好的耐蝕防腐保護(hù)層。

隨著鍋爐參數(shù)和容量的日益增高，對受熱面清潔度和鍋內(nèi)水質(zhì)的要求更加嚴(yán)格。在現(xiàn)代鍋爐機(jī)組中，機(jī)械去垢已不可能，加之近年來化學(xué)清洗工藝也日益完善，是使受熱面內(nèi)表面清潔、防止受熱面因腐蝕和結(jié)垢引起事故的必要措施，同時也是節(jié)能降耗、提高鍋爐熱效率、改善機(jī)組水汽品質(zhì)的有效措施之一。其直接或間接的重要意義在于如下幾個方面：

1.1 提高換熱效率，節(jié)能降耗

通過化學(xué)清洗，可有效地去除沉積在鍋爐熱力設(shè)備表面的導(dǎo)熱系數(shù)很低的垢層，極大地提高了鍋爐的換熱效率，從而達(dá)到節(jié)約能源、降低煤耗的目的。

1.2 延長鍋爐的使用壽命

由于結(jié)垢使導(dǎo)熱性能下降，管壁溫度升高，局部過熱可產(chǎn)生爆裂、爆炸，導(dǎo)致事故，對鍋爐進(jìn)行化學(xué)清洗可降低管壁溫度，有效避免爆管事故，延長設(shè)備使用壽命。另外，沉積物下的金屬容易進(jìn)一步腐蝕，清除沉積可減緩設(shè)備機(jī)體的腐蝕，延長使用壽命。

1.3 減少經(jīng)濟(jì)損失，取得更大效益

無論是提高換熱效率，節(jié)能降耗，還是延長設(shè)備使用壽命，化學(xué)清洗的最終目的都是為了取得更大的經(jīng)濟(jì)效益。

2 針對大容量、高參數(shù)機(jī)組自身的特點(diǎn)，化學(xué)清洗過程中應(yīng)注意問題的探討

2.1 化學(xué)清洗各部位流速控制

由于超臨界、超超臨界機(jī)組鍋爐各部位通流面積相差大，導(dǎo)致各部位清洗流速不一致。如某電廠鍋爐為北京巴布科克?威爾科克斯有限公司生產(chǎn)的超超臨界參數(shù)、變壓運(yùn)行直流爐，一次中間再熱、單爐膛平衡通風(fēng)、露天布置、固態(tài)排渣、全鋼構(gòu)架、全懸吊結(jié)構(gòu)Π型鍋爐，其省煤器、水冷壁規(guī)格、通流面積如表1：

從表1可以看出：該鍋爐省煤器通流面積為水冷壁的3倍多，為確保各部位的清洗流速滿足清洗要求，在清洗泵的選擇上要兼顧各個部位，在確保省煤器流速滿足要求的同時也要防止水冷壁流速過高。

2.2 重點(diǎn)關(guān)注后墻水冷壁化學(xué)清洗期間溫度，防止偏流現(xiàn)象發(fā)生

由于一些超臨界、超超臨界機(jī)組鍋爐水冷壁垂直段后墻結(jié)構(gòu)復(fù)雜，如某電廠鍋爐為超臨界參數(shù)變壓直流爐，其后墻水冷壁就包括了后水冷壁前屏和水平煙道前部側(cè)包墻等，大大增加了后墻的流通阻力，如圖1。

在化學(xué)清洗過程中，由于清洗流速較運(yùn)行時低很多，從而導(dǎo)致后墻容易發(fā)生偏流，因此要求我們在清洗過程中應(yīng)加強(qiáng)后墻溫度監(jiān)測，必要時采取臨時措施，優(yōu)化系統(tǒng)設(shè)計(jì)，單獨(dú)接一路臨時管至后墻水冷壁集箱，加大后墻流量，確保后墻清洗流速滿足要求。

2.3 選取垢量最大的管樣進(jìn)行小型試驗(yàn)，確定最佳化學(xué)清洗工藝

工藝選擇時應(yīng)有針對性，特別是對運(yùn)行爐，其結(jié)垢致密、成分復(fù)雜，清洗前應(yīng)進(jìn)行小型實(shí)驗(yàn)，確定最佳清洗工藝?；瘜W(xué)清洗前應(yīng)根據(jù)鍋爐實(shí)際燃燒情況和水冷壁發(fā)生故障的歷史記錄，選擇多個部位割管，并比較垢量。以垢量最大的管樣進(jìn)行小型試驗(yàn)，確定清洗方案。

現(xiàn)大型鍋爐化學(xué)清洗常用的清洗介質(zhì)有EDTA、檸檬酸、羥基乙酸和甲酸等。EDTA清洗系統(tǒng)簡單，對金屬的腐蝕性較小，清洗液能在金屬表面生成良好的防腐保護(hù)膜，可以清洗和鈍化一步完成，清洗水量及廢液量少，但不宜清洗含硅量高的水垢。檸檬酸對Fe3+有良好的絡(luò)合性能，但酸洗液中鐵含量過高和溶液pH值>4時，易產(chǎn)生檸檬酸鐵垢的沉淀，影響酸洗效果。

篇5

【Abstract】 Objective To investigate the Tetramethylpyrazine (TMP)mediating antiproliferation effect，and define its molecular mechanism in cultured rat aortic vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Cultured cells proliferating model of rats VSMC were established by plateletderived growth factor (PDGF). Cultured cells were randomly pided into three groups: control， PDGF (20 ng/ml)and TMP treatment (20， 40， 80 μmol/L) groups. The number of VSMC were accounted under microscope. The expression of intercellular adhesion molecular1 (ICAM1) and integrinlinked kinase (ILK) were analyzed by Western blotting respectively. Results The proliferation of rat VSMC induced by PDGF could be inhibited by TMP significantly in a dosedependent manner. A remarkable decrease of ICAM1 and ILK expression were demonstrated in the TMP group compared with the PDGF group.Conclusions The antiproliferation effect of TMP associates with suppression of adhesive molecules.

【Key words】 TMP;Adhesive molecules;Signal transduction;Vascular smooth muscle cells (VSMC);Rat

川芎嗪是從具有活血化瘀作用的中藥川芎中分離得到的一種生物堿，化學(xué)組分為四甲基吡嗪，目前已在臨床上廣泛用于心腦血管疾病的治療。我們前期研究證明，川芎嗪通過作用于血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)而發(fā)揮活血化瘀的作用〔1〕，但缺乏在分子水平上闡明其機(jī)制的研究。細(xì)胞間黏附分子(ICAM)是一類介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互作用的膜表面糖蛋白，在單核細(xì)胞及血小板的黏附聚集過程中發(fā)揮著重要的作用，與細(xì)胞增殖密切相關(guān)〔2〕。本研究用血小板源性生長因子(PDGF)刺激體外培養(yǎng)的大鼠VSMC復(fù)制細(xì)胞異常增殖模型，從抑制黏附分子信號傳遞角度探討川芎嗪抗VSMC增殖的機(jī)制，為從分子水平上闡明其活血化瘀作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，明確其作用靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性5周齡SD大鼠，體重(100±10)g，由河北省實(shí)驗(yàn)動物中心提供。川芎嗪注射液 (40 mg/2 ml)由北京第四制藥廠提供。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清FBS由Gibco公司提供。PDGF、小鼠抗ICAM1單克隆抗體、小鼠抗整合素耦聯(lián)激酶(ILK)單克隆抗體、兔抗GAPDH單克隆抗體、HRP標(biāo)記的羊抗小鼠IgG二抗、發(fā)光試劑等均購自美國Santa Cruz公司。其他化學(xué)試劑均為進(jìn)口或國產(chǎn)分析純。

1.2 VSMC的培養(yǎng) 5周齡雄性SD大鼠用25%烏拉坦按照0.4 ml/100 g體重進(jìn)行腹腔注射麻醉，于無菌條件下取大鼠的胸腹主動脈。用0.01 mol/L PBS洗凈管腔內(nèi)血液并剝脫血管外膜后，按貼塊法分離培養(yǎng)VSMC。待細(xì)胞爬滿培養(yǎng)瓶底后，用0.25%胰蛋白酶消化傳代。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長情況，用光鏡及免疫組化的方法進(jìn)行細(xì)胞鑒定。取3～6代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 細(xì)胞分組 取傳代培養(yǎng)的VSMC接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。待VSMC在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中生長至60%～70%融合時，換無血清培養(yǎng)基饑餓培養(yǎng)24 h，使細(xì)胞同步化于靜止期。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為對照組、PDGF刺激組和川芎嗪組。對照組單純加入培養(yǎng)液5 ml;PDGF刺激組添加PDGF使其終濃度為20 ng/ml;川芎嗪組先用不同濃度 (20、40、80 μmol/L) 的川芎嗪注射液預(yù)孵育1 h，然后再加PDGF(20 ng/ml) 刺激24 h。收集各組細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4 Western印跡分析 提取各組細(xì)胞的蛋白，用改良的Lowry法測定濃度。取各組等量蛋白提取液經(jīng)8% SDSPAGE電泳分離后，半干式電轉(zhuǎn)至PVDF膜上，5%脫脂奶粉封閉，分別與鼠抗ICAM1單克隆抗體 (1∶300)、ILK單克隆抗體(1∶400) 在4℃條件下封閉反應(yīng)過夜。用HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗(1∶10 000) 室溫反應(yīng)2 h，經(jīng)TTBS、TBS充分洗滌后采用化學(xué)發(fā)光法顯影。用美國Kodark公司ID數(shù)碼成像分析系統(tǒng)分析結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS10.0 統(tǒng)計(jì)軟件包處理，數(shù)據(jù)以x±s表示，多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 川芎嗪呈劑量依賴性抑制VSMC的增殖 細(xì)胞計(jì)數(shù)后發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，PDGF刺激組細(xì)胞數(shù)量顯著增多，增加約3.8倍。20 μmol/L川芎嗪實(shí)驗(yàn)組對細(xì)胞數(shù)目增加的抑制作用不明顯，40 μmol/L川芎嗪組具有抑制細(xì)胞數(shù)量的作用，此時細(xì)胞數(shù)量約為PDGF刺激組的48%(P

2.2 川芎嗪抑制ICAM1的表達(dá) Western印跡結(jié)果經(jīng)過灰度值對比處理后發(fā)現(xiàn)，正常對照組ICAM1的灰度值表達(dá)量很小，PDGF刺激組ICAM1的表達(dá)量顯著增加。川芎嗪組ICAM1的表達(dá)量與刺激組相比明顯減少，僅相當(dāng)于其的44%(P

2.3 川芎嗪抑制ILK的表達(dá) Western印跡結(jié)果顯示，對照組僅有少量ILK表達(dá);PDGF刺激組ILK的表達(dá)量明顯增加。川芎嗪組ILK的表達(dá)量雖然仍舊比對照組多，但與PDGF刺激組相比降低明顯，僅相當(dāng)于其62%(P

3 討 論

川芎嗪是傘形科植物川芎的主要成分，具有活血化瘀的作用，因可與其他中藥組成方劑，故廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病的救治。大量研究表明川芎嗪可抑制VSMC的異常增殖，但對其確切的分子機(jī)制目前尚不很清楚。現(xiàn)已明確，動脈粥樣硬化等血管增殖性疾病的主要病變特征是血管平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜下遷移與增殖、血小板的黏附聚集、單核/巨噬細(xì)胞浸潤等，黏附分子及其受體的相互作用是引發(fā)這一系列慢性炎癥過程的主要生物學(xué)機(jī)制。因此，如何抑制黏附分子的表達(dá)或阻斷其功能已經(jīng)成為研制抗血管增殖性疾病的新靶標(biāo)〔3〕。

單核細(xì)胞在血管內(nèi)皮黏附并向內(nèi)皮下遷移和泡沫化被認(rèn)為是動脈粥樣硬化的早期病理過程。ICAM1是單鏈跨膜糖蛋白，屬免疫球蛋白超家族成員，分子量為80～110 kD，其受體為整合素家族的黏附分子白細(xì)胞功能相關(guān)抗原1(LFA1)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ICAM1/LFA1的相互作用在淋巴細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用、淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒反應(yīng)過程中具有至關(guān)重要的作用〔4〕。ICAM1可分布于白細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及某些腫瘤細(xì)胞上，正常情況下很少或不表達(dá)，在炎癥、內(nèi)皮損傷等病理生理?xiàng)l件下表達(dá)增加，從而促進(jìn)炎癥的發(fā)生與發(fā)展〔5〕。所以阻斷黏附分子的作用可能會抑制細(xì)胞的遷移與增殖。本研究結(jié)果顯示，對照組ICAM1很少表達(dá)，這可能是由于此時 VSMC 正處于分化狀態(tài)不具有增殖活性，PDGF刺激組由于細(xì)胞異常增生活躍，故 ICAM1 的表達(dá)量明顯增多，川芎嗪組 ICAM1 的表達(dá)量與比PDGF刺激組相比顯著減少，提示川芎嗪可能通過抑制ICAM1的表達(dá)而發(fā)揮抗VSMC增殖的作用。

ILK是1996年Hannigan等〔6〕用酵母雙雜交的方法研究整合素β1結(jié)合蛋白的過程中被發(fā)現(xiàn)的。它具有Ser/Thr蛋白激酶結(jié)構(gòu)，是一個59 kD的細(xì)胞內(nèi)信號蛋白，廣泛分布于多種細(xì)胞中，對黏附分子信號跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)起者關(guān)鍵性的介導(dǎo)作用。ILK可以與整合素β1、β2、β3亞基胞漿區(qū)域及細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白結(jié)合，以依賴于PI3K的方式被激活?；罨蟮腎LK可以磷酸化蛋白激酶B (PKB) 的Ser473和糖原合成酶激酶3 (GSK3)，進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。ILK在調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附與生長、腫瘤形成等過程中均起重要作用，是保證黏附信號進(jìn)一步向下游傳遞的重要調(diào)節(jié)分子。為了探討川芎嗪抑制ICAM1表達(dá)的生物學(xué)意義，本研究進(jìn)一步觀察了ILK在增殖細(xì)胞中的表達(dá)變化。Western印跡結(jié)果顯示，作為黏附分子信號傳遞關(guān)鍵性調(diào)節(jié)激酶的ILK在各個實(shí)驗(yàn)組中的變化趨勢與ICAM1的改變基本相同。以上結(jié)果提示，川芎嗪可能通過下調(diào)ILK的表達(dá)得以阻斷細(xì)胞黏附與遷移的信號在VSMC內(nèi)的傳遞;通過減少ICAM1的表達(dá)減弱炎細(xì)胞的黏附與聚集，從而削弱局部的炎癥反應(yīng)，起到抑制細(xì)胞異常增殖的作用。

總之，本研究結(jié)果提示川芎嗪可逆轉(zhuǎn)由PDGF刺激導(dǎo)致的VSMC異常增殖，其分子機(jī)制與阻斷黏附分子信號傳遞、抑制黏附分子表達(dá)有關(guān)。由于中藥具有多層次多靶點(diǎn)作用的特點(diǎn)，川芎嗪是否還通過其他途徑抑制VSMC異常增殖還需做進(jìn)一步的探討。

參考文獻(xiàn)

1 狄柯坪，常立功.川芎嗪對家兔腸系膜微血管運(yùn)動的作用機(jī)理與一氧化氮的關(guān)系〔J〕.中成藥，2003;25(1)：4951.

2 高 巖，夏 蕾，白 明.實(shí)驗(yàn)性大鼠肺血栓栓塞癥中ICAM1，P選擇素的變化及當(dāng)歸注射液的影響〔J〕.中國微循環(huán)，2007;11(3)：1769.

3 Shimizu N，Suzuki H， Wakabayashi K，et al.Expression of intercellular adhesion molecule1 and vascular cell adhesion molecule1 in the pig coronary artery injury model：comparison of plain old balloon angioplasty and stent implantation〔J〕.J Cardiol，2004;43(3)：1319.

篇6

中圖分類號：G40文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1674-2117（2014）12-00-01

1 新技術(shù)的引入

目前，對網(wǎng)頁上數(shù)學(xué)公式的編輯問題通常采用以下解決方案：通過圖片顯示和通過（數(shù)學(xué)公式標(biāo)記語言）顯示數(shù)學(xué)公式。需要在符合要求的瀏覽器中才可以顯示，但占市場主流的IE瀏覽器等都不具備符合的條件。這幾種技術(shù)對于數(shù)學(xué)類網(wǎng)絡(luò)答疑和考試系統(tǒng)來說都不太方便。筆者使用的網(wǎng)絡(luò)在線公式編輯工具和網(wǎng)絡(luò)在線圖形編輯工具全面支持公式和圖形的在線輸入與編輯，支撐在線復(fù)制、粘貼與修改數(shù)學(xué)公式和所編圖形的強(qiáng)大功能；并且客戶端不需要安裝相應(yīng)插件，突破了網(wǎng)絡(luò)輔導(dǎo)答疑系統(tǒng)中數(shù)學(xué)公式輸入的技術(shù)瓶頸，界面如下圖所示。

由于這種新技術(shù)剛剛出現(xiàn)不久，尚未在各種答疑系統(tǒng)和考試系統(tǒng)中得到廣泛的應(yīng)用。本文旨在借助這兩種先進(jìn)的技術(shù)對我校的數(shù)學(xué)課程網(wǎng)絡(luò)輔導(dǎo)答疑與考試系統(tǒng)進(jìn)行一體化設(shè)計(jì)與應(yīng)用。更好地為教師和學(xué)生服務(wù)，為國家精品資源共享課建設(shè)奠定基礎(chǔ)。

2 建立實(shí)用性強(qiáng)的網(wǎng)絡(luò)輔導(dǎo)答疑系統(tǒng)模塊

我們已經(jīng)對該系統(tǒng)做了初步的研究，如下圖所示。

目前該系統(tǒng)的功能還不是十分完善。在后續(xù)研究中，本系統(tǒng)將增加章節(jié)索引功能和搜索功能：章節(jié)索引功能可以使學(xué)生快速定位自己的問題所在，實(shí)現(xiàn)先學(xué)習(xí)再提問的目的；搜索功能將幫助學(xué)生快速查找本系統(tǒng)是不是已經(jīng)存在和自己相似的問題，且該搜索功能將全面支持公式的搜索。我們力爭引入和推廣MathQ學(xué)習(xí)交互的軟件，MathQ軟件就像我們的QQ一樣，能夠?qū)崿F(xiàn)在線交流功能，包括點(diǎn)對點(diǎn)的和群組之間的。

3 建立功能齊全的在線考試系統(tǒng)模塊

我校輕工學(xué)院已經(jīng)試用了一套在線考試平臺，如右圖所示。該系統(tǒng)已經(jīng)成功實(shí)現(xiàn)了在線考試和成績收集功能。在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步完善功能，使該系統(tǒng)支持課程在線作業(yè)、訓(xùn)練測試與在線考試模式，支持成績統(tǒng)計(jì)分析與試卷分析，在線測試包含考點(diǎn)設(shè)置、試題建設(shè)等測試題庫建設(shè)功能，同時支持從網(wǎng)絡(luò)試題庫的試卷庫中導(dǎo)入試卷來測試。通過在線測試系統(tǒng)，教師根據(jù)學(xué)生的每次測試成績，可以給出其一個發(fā)展性的評價，及時掌握學(xué)生的學(xué)習(xí)動態(tài)，并調(diào)整教學(xué)計(jì)劃與安排，最終能夠獲得一個良好的教學(xué)效果。

本研究將新技術(shù)應(yīng)用到數(shù)學(xué)課程網(wǎng)絡(luò)輔導(dǎo)答疑與考試系統(tǒng)中，由于系統(tǒng)內(nèi)集成基于Web的公式編輯和圖形編輯器，從而支持各數(shù)學(xué)專業(yè)學(xué)科知識的在線交互、在線答疑和在線考試，完成了數(shù)學(xué)學(xué)科知識的在線交互。網(wǎng)絡(luò)輔導(dǎo)答疑系統(tǒng)徹底地解決了公式和圖形的在線編輯問題，提高了答疑工作的便捷性與及時性，增加了師生之間和學(xué)生之間的互動性，激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，提高了教學(xué)質(zhì)量。在實(shí)際教學(xué)中，在線考試系統(tǒng)完善了教學(xué)模式的轉(zhuǎn)變，使其總結(jié)性評價的教學(xué)模式向發(fā)展性評價的教學(xué)模式順利過渡。網(wǎng)絡(luò)輔導(dǎo)答疑系統(tǒng)不僅減輕了教師負(fù)擔(dān)，讓其有更多的時間用于對學(xué)生的輔導(dǎo)和答疑，而且加強(qiáng)了學(xué)生的學(xué)習(xí)效果與自主學(xué)習(xí)能力，更加科學(xué)、公平、合理地評價學(xué)生。

參考文獻(xiàn):

[1]趙曉青等. 大學(xué)數(shù)學(xué)課程網(wǎng)絡(luò)教學(xué)系統(tǒng)建設(shè)的探討[J]. 石家莊鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào), 2005.

篇7

[中圖分類號] r-33 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] a [文章編號] 1674-4721（2013）05（c）-0016-03

老年性癡呆亦稱阿爾茨海默?。╝lzheimer' s disease，ad），它是一種極其常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，由于病因及發(fā)病機(jī)制至今不清，發(fā)病以后很難治愈，給患者的日常生活也帶來了很大的不便。ad患者腦內(nèi)含有大量的以異常過度磷酸化的tau蛋白為主要成分的神經(jīng)元纖維纏結(jié)（nfts）[1]，有研究[2]發(fā)現(xiàn)ad患者的癡呆程度與神經(jīng)原纖維的纏結(jié)數(shù)目具有密切的關(guān)系，而神經(jīng)原纖維增粗扭曲形成纏結(jié)正意味著神經(jīng)元趨于死亡，因此也可以驗(yàn)證出ad患者的癡呆程度與神經(jīng)原纖維的纏結(jié)數(shù)目是呈正相關(guān)[3]趨勢增長的說法。所以可以大膽地推斷海馬tau蛋白的過度磷酸化其實(shí)就是ad的核心原因。而電針治療通過電流微弱的刺激大鼠海馬區(qū)域，以此來增強(qiáng)其活性，通過激活磷酸酯酶活性，來限制ad患者腦tau蛋白異常過度磷酸化，從而進(jìn)一步改善ad的發(fā)病癥狀。此實(shí)驗(yàn)初步探究電針刺激大鼠海馬區(qū)，旨在證明電針能改善ad大鼠的記憶能力，抑制tau蛋白異常過度磷酸化，進(jìn)而延緩ad的發(fā)展并改善其癥狀。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

健康的sd雄性大鼠60只，體重180～200 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供（批號：2010002）。在實(shí)驗(yàn)室穩(wěn)定條件下飼養(yǎng)1周。

1.2 主要試劑及儀器

戊巴比妥鈉（上海索萊寶生物科技有限公司）；ab25-35（美國chemicon公司）；tau-5單克隆抗體、tau-1單克隆抗體、p-tau（s396）多克隆抗體（biosource公司）；腦立體定位儀（narishige sn-2型）；morris水迷宮（北京碩林苑科技有限公司）；全能脈沖電療儀（6805-c型）（汕頭市醫(yī)用設(shè)備廠有限公司）；無菌針灸針（北京健樂康醫(yī)療器械有限公司）。

1.3 動物造模

將大鼠稱重并用4%戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔麻醉注射之后，將大鼠固定在大鼠腦立體定位儀上，并且可以參照《大鼠腦立體定位圖譜》先對大鼠進(jìn)行最常規(guī)的消毒，然后切口于顱頂正中矢狀，將骨膜分離，用錐顱器快速鉆開顱骨，使硬腦膜完全暴露出來。于前囟1.3 mm，矢狀縫左右旁開1.6 mm，垂直3.5 mm，用微量注射器對每側(cè)側(cè)腦室各注射aβ25-35（實(shí)驗(yàn)前將其溶于0.9%氯化鈉溶液中，配置成濃度10%）。用微量注射器將aβ25-35在3 min內(nèi)緩慢注入，留針5 min，充分浸潤局部組織，緩慢拔出微量注射器。第3天重復(fù)注射試劑，劑量相同，正常組不用注射藥品。

1.4 分組和治療

將雄性sd大鼠30只隨機(jī)分成正常組、模型組和電針組，每組10只。電針組：第2次水迷宮測試結(jié)束后，用毫針針刺“百會”穴，平刺約2.5 mm，“大椎”穴，直刺約4 mm?！鞍贂毖?、“大椎”穴連接6805-c型全能脈沖電療儀，頻率為30 hz，電壓為2 v，強(qiáng)度是以肢體輕微抖動為宜，用針刺大鼠雙側(cè)“太溪”穴，雙側(cè)“腎俞”穴，直刺進(jìn)針5 mm，雙側(cè) “足三里”穴，直刺進(jìn)針4 mm，間歇5 min捻轉(zhuǎn)一次，每日1次，時間40 min。7 d為1個療程，間歇1 d，治療3個療程后進(jìn)行行為學(xué)測試。正常組：給予正規(guī)的飼養(yǎng)，模型組：造模后常規(guī)飼養(yǎng)。

1.5 morris水迷宮測試

迷宮水池中的平臺位于東北象限正中，水面高出平臺100 cm，將大鼠面向池壁分別從4個入水點(diǎn)放入水中，記錄其在2 min內(nèi)尋找到并爬上平臺的時間即逃避潛伏期。潛伏期最長時間120 s。分別在治療前后進(jìn)行游泳實(shí)驗(yàn)

，大鼠每次在2 min內(nèi)尋找到并爬上平臺的時間為大鼠的記憶成績，每日2次，連續(xù)5 d，然后計(jì)算出測試結(jié)果的平均成績。

1.6 檢測大鼠海馬tau蛋白含量

第2次大鼠進(jìn)行水迷宮試驗(yàn)結(jié)束后，將其斷頭取腦，分離雙側(cè)海馬，放入冰箱中冷凍保存，用western blot法來檢測大鼠海馬區(qū)tau蛋白的含量。在1 ml組織裂解液勻漿中加入雙側(cè)海馬，等待離心5 min后提取上層清液，并利用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行蛋白濃度的測定，將各組所得蛋白調(diào)整成等濃度的溶液樣品。等量蛋白樣品經(jīng)過10% sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到pvdf膜封閉2個小時，加入一抗（tau-5檢測tau蛋白總量，tau-1檢測198位點(diǎn)非磷酸化tau蛋白，s396 tau檢測404位點(diǎn)磷酸化tau蛋白），孵育過夜，洗膜3次，加入二抗室溫孵育2 h，洗膜13次。凝膠成像儀拍攝圖像，image j軟件測定平均光密度（od）值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用spss 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析包，進(jìn)行單因素方差分析，組間比較用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以x±s表示，p < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1 各組大鼠morris水迷宮試驗(yàn)逃避潛伏期比較

治療前模型組和電針組的時間延長與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均p < 0.05），治療后模型組大鼠的逃避潛伏期的平均值相對于正常組和電針組的時間長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均p < 0.05）。見表1。

2.2 各組大鼠海馬tau蛋白含量比較

tau-5蛋白3組間的含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與模型組相比電針組海馬tau-1含量明顯偏高，但是s396 tau蛋白的含量卻明顯比模型組（均p < 0.05）低很多，s396 tau蛋白含量及電針組海馬tau-1的含量與正常組相比，它們之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

3 討論

老年性癡呆又稱阿爾茨海默?。╝lzheimer's disease，ad），是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（cns）退行性疾病?；颊咧凶罹咛卣餍缘纳窠?jīng)病理改變就是神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)大量的神經(jīng)原纖維纏結(jié)，神經(jīng)原纖維纏結(jié)（nft）多出現(xiàn)在海馬、皮質(zhì)以及基底前腦的神經(jīng)元中，其病理特征為大腦皮質(zhì)及海馬等處的老年斑（sp）和nft[4]。在ad患者中，其病理?xiàng)l件下，tau蛋白會不斷的發(fā)生異常過度磷酸化的改變，因此會喪失與微管相互結(jié)合的能力，而且這些磷酸化的蛋白會聚集在一起并形成 nft（也就是說會使大量的神經(jīng)元纖維纏結(jié)），結(jié)果會導(dǎo)致微管解聚，破壞了細(xì)胞的正常骨架，更會損壞正常軸突的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，由此導(dǎo)致了突觸丟失并引發(fā)退行性的病理改變。而神經(jīng)原纖維纏結(jié)主要是由雙股螺旋纖維構(gòu)成的，tau蛋白過度磷酸化會形成各種各樣的同分異構(gòu)體，這些異構(gòu)體正是雙股螺旋纖維的主要成分，細(xì)胞之中tau蛋白過度磷酸化是ad最早出現(xiàn)的病理改變之一[5]。有關(guān)的最新研究表明[6-8]，關(guān)于aβ所導(dǎo)致的失憶和生理行為的缺陷，其實(shí)都是依賴于tau蛋白分子所具有的獨(dú)特功能。因此，怎樣預(yù)防并改善tau蛋白過度磷酸化是現(xiàn)代化科學(xué)對ad病理學(xué)研究的關(guān)鍵性所在。

tau蛋白是在1975年weingarten等在采用豬腦分離純化微管蛋白的同時，被首次分離出來的一種與微管的組裝具有密切關(guān)系的含磷糖蛋白。它能使微管的功能和結(jié)構(gòu)維持正常穩(wěn)定的基礎(chǔ)，而且它的功能也受到磷酸化水平調(diào)節(jié)，tau蛋白構(gòu)象改變的主要原因之一就是其過度磷酸化所導(dǎo)致的，它也會因此喪失促微管組裝的生物學(xué)活性及功能，而且對蛋白水解酶的抗性增加，會產(chǎn)生神經(jīng)毒性[9-11]，進(jìn)而危害機(jī)體健康。tau蛋白在ad患者腦內(nèi)磷酸化程度高出正常人3～4倍。在ad患者的大腦內(nèi)存在3種tau蛋白，一是細(xì)胞質(zhì)正常tau蛋白（c-tau），二是過度磷酸化易溶型tau蛋白（adp-tau），第三種是聚集成phf的tau蛋白（phf-tau）。到目前為止，在phf-tau中已經(jīng)鑒定出45個磷酸化位點(diǎn)[12]，其中主要是蘇氨酸和絲氨酸殘基發(fā)生過度磷酸化，本實(shí)驗(yàn)是在絲氨酸的198和404位點(diǎn)展開進(jìn)行的。電針通過對大鼠海馬區(qū)的刺激，來增強(qiáng)細(xì)胞活性，通過激活磷酸酯酶活性，來限制ad患者腦tau蛋白異常過度磷酸化，從而進(jìn)一步改善ad的發(fā)病癥狀。

祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腦為髓海、精明之府，腎藏精，生髓，通于腦，髓由腎中精氣化生?！端貑枴ば魑鍤馄吩唬骸澳I藏志?！敝荆礊橛洃?、學(xué)習(xí)能力。清·林佩琴《類證治裁》曰：“夫人之神宅于心，心之精根于腎，而腦為元神之府，精髓之海，實(shí)記憶之所憑也?！闭f明腎中如若精氣充盈，則神清氣朗，耳聰目明。由此用“百會”“大椎”“太溪”“腎俞”“足三里”組成針灸治

療，通過影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，能抗氧化，以及改善突觸形態(tài)可塑性及長時程增強(qiáng)效應(yīng)，來直接或間接提高ad大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[13-15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，針能減低aβ所致的tau蛋白在198和404位點(diǎn)磷酸化水平，提示電針治療有一定的抑制tau蛋白磷酸化的作用，這將有助于神經(jīng)元微管系統(tǒng)的穩(wěn)定，起到保護(hù)神經(jīng)元的作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 王建枝. tau蛋白基因突變與神經(jīng)退行性疾病[j]. 生命的化學(xué)，1999，19（6）：288-290.

[2] lee vm，balin bj，otvos l，et al. a68：amajor subunitofpairedhelical filaments and derivatized forms of normal tau[j]. science，1991，251：675.

[3] braak h. neuroanatomy of alzheimer diseaes[j]. alzheimers research，1997，33：235-247.

[4] 萬章. tau蛋白過度磷酸化在阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制中的作用[j]. 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2010，23（5）：539-542.

篇8

中圖分類號：G42 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1005-5312（2012）05-0238-01

教育的根本任務(wù)在于“育人”。所謂“育人”就是要促進(jìn)個體的身心發(fā)展，實(shí)現(xiàn)個體的社會化。不論是基礎(chǔ)教育還是高等教育，都應(yīng)把全面提高青年一代的文化素質(zhì)作為首要目標(biāo)。而作為文化搖籃的高等學(xué)府，更應(yīng)把構(gòu)建人文修養(yǎng)和人文精神作為最基本的職能。

加強(qiáng)文化素質(zhì)教育的探索與實(shí)踐，是我國高等教育教育思想和觀念改革的“催化劑”。在提高人才的整體素質(zhì)的過程中具有重要的基礎(chǔ)性的地位和作用。藝術(shù)教育作為人文教育之中堅(jiān),其發(fā)揮的作用不可低估。但遺憾的是，很多高校都陷入了“智育第一”的誤區(qū)，長期忽視學(xué)生全面素質(zhì)，特別是人文素質(zhì)的培養(yǎng)，藝術(shù)教育依然只是專業(yè)教育的“點(diǎn)綴”。大家普遍認(rèn)為，藝術(shù)教育只適合藝術(shù)類或文科學(xué)生，學(xué)理工的去學(xué)藝術(shù)沒有任何意義，這是教育的功力傾向和實(shí)用主義不斷蔓延泛濫的結(jié)果。事實(shí)上，專業(yè)教育只是全面發(fā)展教育的一項(xiàng)內(nèi)容，它雖然對拓寬人的認(rèn)識、啟迪人的智慧等方面有重要作用，但主要功能還是使學(xué)生獲得專門的知識和技能。如果大學(xué)生只重視可以帶來實(shí)際效益的專業(yè)知識的學(xué)習(xí)，而輕視藝術(shù)修養(yǎng)方面的教育和熏陶，學(xué)校只重視智育不重視人文教育，教師只教書不教人，這種情況，長此以往，將會造成人類素質(zhì)和文明的倒退，必將引發(fā)很嚴(yán)重的社會問題。

所以，藝術(shù)教育應(yīng)該是面向全體學(xué)生的審美教育,它通過情感、形象、審美等教育活動,引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行藝術(shù)鑒賞與表現(xiàn),提升自己的文化品位與創(chuàng)新思維能力，而創(chuàng)新思維能力，就是理工科學(xué)生應(yīng)具備的必不可少的能力之一。理工科學(xué)生主要運(yùn)用抽象思維，忽略了人的情感作用，而藝術(shù)范疇則側(cè)重形象思維。如果能把抽象思維與形象思維完美的結(jié)合起來，便可如虎添翼。從古至今，許多科學(xué)家不僅在自己的學(xué)科領(lǐng)域卓有成就，而且在人文科學(xué)、藝術(shù)方面也具有良好的修養(yǎng)。說“音樂成就了愛因斯坦”這話一點(diǎn)不為過。 讀過愛因斯坦傳記的人，也許都不會輕易忘記這位科學(xué)巨匠的另一種生活：他常常陶醉在美妙的旋律中，并在美的和諧中觸摸宇宙的“神經(jīng)”。當(dāng)他體驗(yàn)到演奏莫扎特的奏鳴曲所帶來的那種無法言喻的快樂時，音樂就成為他一生的至愛。用莫斯考夫斯基的話說，扶搖直上的巴赫音樂使愛因斯坦不僅聯(lián)想到聳入云端的哥特式教堂的結(jié)構(gòu)形狀，而且還聯(lián)想到數(shù)學(xué)結(jié)構(gòu)的嚴(yán)密邏輯。彈鋼琴，是愛因斯坦工作之后的消遣，亦是他工作之前的娛樂或激勵。當(dāng)然，愛因斯坦不是為娛樂而娛樂，而是借助音樂深入那個“廣漠無垠的宇宙”，獲得超個人的體驗(yàn)。有時，一支樂曲進(jìn)行到途中，愛因斯坦會突然停下，也許是一段優(yōu)美的旋律觸動了靈感，愛因斯坦又開始了他的科學(xué)獨(dú)白。量子論創(chuàng)始人普朗克家也彈得一手好鋼琴，他常與愛因斯坦一起演奏貝多芬的作品。這兩位理論物理學(xué)大師心心相印，無論在科學(xué)領(lǐng)域，還是在藝術(shù)領(lǐng)域，他們都用親密的“語言”互相交流，共同描繪一幅壯麗的藍(lán)圖。還有我國著名的地質(zhì)學(xué)家李四光，他年少時就喜歡音樂，小提琴也拉的很不錯，并且他還是中國第一首小提琴的作曲者，早在1920年，他在巴黎的時候就創(chuàng)作了小提琴獨(dú)奏曲《行路難》，全曲有頭有尾，層次清晰，最難能可貴的是樂曲立意深邃。毫無疑問，音樂是他們心靈的天堂，他們可以隨時摒棄人世間的一切喧囂，自由自在地漫步于美妙的音樂王國，沉浸于浪漫的遐思和深邃的思想之中。

可以說，音樂是作為一種精神催化劑，悄然滲透到這些科學(xué)家的思維中去的。他們對事物有著卓越的直覺能力，這種令人嘆為觀止的直覺能力，實(shí)則與藝術(shù)家的想象有異曲同工之妙,所以他們可以被稱之為“科學(xué)的藝術(shù)家”。 誠如郭沫若對科技工作者的忠告：“科學(xué)也需要創(chuàng)造，需要幻想，有了幻想才能打破傳統(tǒng)的束縛，才能發(fā)展科學(xué)”。所以在大學(xué)生文化素質(zhì)提高與完善的重要時期，盡管學(xué)生所學(xué)專業(yè)不同，都應(yīng)有選擇地開設(shè)藝術(shù)課，讓他們接受良好的藝術(shù)教育。

篇9

The expression and intervention of medicion of heme oxygenase．1/CO in idiopathic pulmonary fibrosis of rats BAO Wen．hua，SHI Feng，XING Ji．qiang.Department of Pulmonary Medicine， The First Affiliated Hospital of Jiamusi University．Jiamusi，Heilongjiang Province 154002，China

【Abstract】 Objective To investigate the expression and intervention of medicion of heme oxygenase．1/CO in idiopathic pulmonary fibrosis.To offer new method for early diagmosis and therapy of idiopathic pulmonary fibrosis.Methods 60healty wistar rats was divided into four groups randormly.Discern for:nornal control group、idiopathic pulmonary fibrosis group、the group of specific stimulator of HO．1,the group of specific inhibitorof HO．1．Measured the levels of HO．1 activity and COHb in blood and lung tissues of each group，to analyze effection of HO．1/CO，and influence of medinces in idiopathic pulmonary fibrosis.Results HO．1and COHb was expressd very lowly in blood and lung tissues,and there was not association between HO．1 expression and COHb expression(P>0．05).In idiopathic pulmonary fibrosis group，group of specific stimulator and the group of specific inhibitor，HO．1 expression and COHb expression in blood and lung tissues was higher than the goup of control， and there was significant association between HO．1 expression and COHb expression(P

【Key words】 Idiopathic pulmonary fibrosis；Bleomycin；Hemin； SnPP； HO．1；CO

肺纖維化(pulmonary fibrosis,PF)是由于過多的成纖維細(xì)胞聚集和細(xì)胞外的基質(zhì)成分沉積而導(dǎo)致正常的肺組織結(jié)構(gòu)改變和功能喪失的一類疾病。血紅素氧合酶(heme oxygenase,HO)是哺乳動物組織細(xì)胞微粒體的一種蛋白酶,催化血紅素產(chǎn)生膽綠素、一氧化碳(CO)和亞鐵，研究[1]提示氣道平滑肌中存在HO．1和HO．2,HO．1主要是被一些因素誘導(dǎo)產(chǎn)生,包括缺氧、應(yīng)激等。Prabhakar[2]等的研究表明，通常HO．1的表達(dá)很低甚至缺乏,但在應(yīng)激和缺氧情況下明顯提高，肺纖維化可使機(jī)體處于缺氧狀態(tài)，故推測可使HO．1的表達(dá)增加，體內(nèi)COHb生成增多，利用大鼠肺纖維化模型和應(yīng)用HO．1的特異性激動劑和抑制劑，研究HO．1/CO在肺纖維化大鼠中的表達(dá)及藥物干預(yù)的影響，為臨床肺纖維化治療提供一種新方法。

1 材料與方法

1．1 材料 應(yīng)用佳木斯大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供健康Wistar大鼠(黑動第99102001)60只,雌雄各半,體質(zhì)量170~200 g,正鐵血紅素購自美國Sigma公司，錫原卟啉(SnPP)購自美國Sigma公司，博萊霉素(BLM．A5)購自黑龍江省哈爾濱博萊制藥有限公司，UV．756MC型紫外可見分光光度計(jì)購自上海精密化學(xué)有限公司。

1．2 方法

1．2．1 模型制備 參考文獻(xiàn)方法略做改進(jìn)[3．4]，將大鼠麻醉，氣管內(nèi)注射博來霉素(BLM．A 5．5 mg/kg)0．2~0．3 ml，建立肺纖維化組模型，氣管內(nèi)注射等量的生理鹽水建立對照組模型，在肺纖維化模型組基礎(chǔ)上分別腹腔注射血晶素或錫原卟啉(125 μmol/kg)注射液0．5 ml/d，建立加強(qiáng)組與抑制組模型。

1．2．2 評價 病理學(xué)檢查:在大鼠肺纖維化造模后第7、14、28 d,在每個實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)處死5只動物,分離肺臟,注入10%(體積分?jǐn)?shù))福爾馬林液1．5 ml保持30 min后,投入Bouins液固定24 h,常規(guī)脫水,石蠟包埋后,切片(3 μm)，行蘇木精．伊紅(HE)和Mallorys三色染色。光鏡下觀察有無炎性反應(yīng)及纖維化發(fā)生。評價是采取Szapiel等[5]定量或半定量方法。

1．2．3 觀察指標(biāo)

1．2．3．1 肺組織與血清中HO．1活性測定 將肺均漿上清液和血清各20 μl中加入2 mmol/L正鐵血紅素40 μl，4．5 mmol/L還原性輔酶Ⅱ40 μl，同一只健康豚鼠的肝組織勻漿上清液20 μl,0．1 mol/L的KH2PO4緩沖液(pH 7．4)1．8 ml，避光置37℃恒溫水浴箱中，10 min后，將反應(yīng)物棕色小瓶置于冰上終止反應(yīng)。不含NADPH的樣品做空白對照，在分光光度計(jì)上用464 nm和530 nm雙波長測定膽紅素生成量[2]

1．2．3．2 全血COHb含量測定：參照樂宏元等[6]的方法，新鮮血中加入保險(xiǎn)粉(Na2S2O4)250 mg，使樣品中多組分的血紅蛋白轉(zhuǎn)化為Hb和COHb兩個組分，在UV．756MC型紫外可見分光光度計(jì)上用420 nm和432 nm兩個波長測定吸光度，依比爾定律建立綜合方程式求出全血COHb的百分含量。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)加標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，計(jì)數(shù)資料采用SPSS13．0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、相關(guān)性分析，計(jì)量資料采用秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2．1 大鼠肺組織形態(tài)學(xué)及病理學(xué)觀察 在對照組中，第7、14、28天肺組織成淡紅色，表面光滑，未見明顯出血點(diǎn)，無明顯炎性反應(yīng)及纖維化的發(fā)生，且各時間段無明顯變化。在肺纖維化組中，肺組織出現(xiàn)明顯的出血水腫，并逐漸融合成片，形成斑片狀、結(jié)節(jié)狀纖維化，并隨時間延長，肺纖維化組中炎性反應(yīng)程度逐漸減輕，纖維化程度逐漸加重；加強(qiáng)組中，僅出現(xiàn)炎性反應(yīng)性改變，無肺纖維化發(fā)生；抑制組中，肺纖維化程度較對照組、肺纖維化組及加強(qiáng)組最重，出現(xiàn)廣泛的肺纖維化。

2．2 大鼠肺組織肺泡炎及纖維化程度 在正常對照組中僅可見少量輕度肺泡炎；在肺纖維化組中，造模后的第7天，出現(xiàn)廣泛的肺泡炎，在第14天、28天組中，隨著時間的延長，炎性反應(yīng)逐漸減輕，肺纖維化程度逐漸加重，形成廣泛的肺纖維化；激動劑組中，肺泡出現(xiàn)較輕的炎癥改變，無肺纖維化形成；在抑制劑組中，肺纖維化程度最重，出現(xiàn)廣泛的肺纖維化。

2．3 大鼠血清COHb水平變化 在激動劑組與纖維化組中，血清COHb水平隨時間逐漸增加；在抑制劑組中血清COHb水平逐漸減少，各組比較見表1。

3 討論

3．1 關(guān)于博來霉素致大鼠肺纖維化的動物模型 肺纖維化是一種慢性炎癥性間質(zhì)性肺疾病，主要表現(xiàn)為彌漫性肺泡炎、肺泡單位結(jié)構(gòu)紊亂和肺纖維化病變，從起始癥狀到病情逐漸惡化，進(jìn)而導(dǎo)致呼吸功能不全而死亡一般為3~5年，其病因尚不清楚，發(fā)病機(jī)制仍不明了。為了探討HO．1/CO體系在大鼠肺纖維化中的表達(dá)及血晶素及錫原卟啉對其的干預(yù)，復(fù)制穩(wěn)定的動物模型是本試驗(yàn)的根本保證。本試驗(yàn)對博來霉素導(dǎo)致大鼠肺纖維化進(jìn)行了28 d的動態(tài)觀察，包括整體病情、精神、飲食、活動能力、一般反應(yīng)、體質(zhì)量的變化以及肺組織病理學(xué)觀察，結(jié)果顯示本試驗(yàn)采用博來霉素致肺纖維化模型是成功而穩(wěn)定的，與文獻(xiàn)結(jié)果一致。

3．2 血紅素氧合酶．1/一氧化碳與肺纖維化 血紅素氧合酶(heme oxygenase,HO)是哺乳動物體內(nèi)與亞鐵血紅素代謝相關(guān)的,一族具有多種功能的微粒體氧化酶，是血紅素分解代謝的限速酶，由HO．1、HO．2和HO．3三種同工酶構(gòu)成，其中HO．1為誘導(dǎo)型的血紅素氧合酶，它廣泛分布于全身組織細(xì)胞的微粒體內(nèi)，其活性在多種因素的誘導(dǎo)下，約可提高100倍，是目前已知最易受誘導(dǎo)的酶之一。一氧化碳(CO)與一氧化氮(NO)一樣，都是雙原子、小分子氣態(tài)物質(zhì)，20世紀(jì)90年代初期CO受到廣泛關(guān)注，研究結(jié)果證實(shí)，CO是一種重要的細(xì)胞信使分子，在細(xì)胞功能和通訊的調(diào)節(jié)中發(fā)揮信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，其在心血管、呼吸、神經(jīng)、免疫和內(nèi)分泌等系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的生物學(xué)效應(yīng)。

通過本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，對照組肺組織與血清中HO．1含量與血清中COHb的含量均很少，且兩者無明顯相關(guān)性，在單純肺纖維化組中其兩者的含量明顯增加，并成正相關(guān)發(fā)展(P

參考文獻(xiàn)

1 McCoubrey WK,Huang TJ,Maines MD.Isolation and characterization of a cDNA from the rat brain that encodes hemoprotein heme oxygenase．3．European Journal of Biochemistry,1997,247:725．732.

2 Prabhakar N R，Dinerman JL，Agani FH，et al.Carbon monoxide:a role in carotidbody chemoreception.Proc Natl Acad Sci USA，1995，92(6):1994．1997.

3 Kai Zh,Mehrnaz GK，Bridget MC，et al.TNF．α mediated lung cytokine networking and eosinpphil recrucitment in pulmonary fibuosis.Immunology,1996,23:954．959.

4 李學(xué)軍，崔社懷.三七總甙及甲潑尼龍對實(shí)驗(yàn)大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及機(jī)制的初步探討.中華結(jié)核與呼吸雜志，2002，25：520．523.

篇10

中圖分類號：R54文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1009_816X（2016）02_0104_05

doi：103969/jissn1009_816x20160208Inhibition on Homocysteine_induced_transformation of Rat Aortic Vascular Smooth Muscle Cells Phenotype by Yellow Rice Wine Polyphenols WU Qiu_de， GUO Hang_yuan， MENG Li_ping， et al Xidian Township Hostipal of Ninghai Country， Zhejiang 315600， China

[Abstract] Objective To verify the inhibition of yellow wine polyphenols on homocysteine（Hcy）_induced_transformation of rat aortic vascular smooth muscle cells（VSMCs） phenotype Methods Rat VSMCs in primary culture were identificated， and VSMCs in passage 4_7 were used for the following experiments The VSMCs were divided into 5 groups： control group， Hcy （100umol/L ） modulation group， Hcy+polyphenols modulation group， Hcy+alcohol modulation group， Hcy + yellow wine modulation group MTT were used to investigate the proliferation of VSMCs Transwell chambers and wound healing were employed to test the migratory ability of VSMCs ICC were used to detect the VSMCs’ morphology structure Western blotting were used to investigate the expressions of SM_actin， SM_MHC， Calponin and OPN in VSMCs of every group Results Compared with control group， the proliferation and migration ability of VSMCs were significantly increased in the Hcy modulation group （P

[Key words] Yellow wine polyphenol； Hcy； VSMCs； Smooth muscle cell phenotype transformation

血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的增殖和遷移是動脈粥樣硬化（AS）發(fā)展過程中重要的病理基礎(chǔ)，也是造成支架植入或冠狀動脈搭橋術(shù)后血管再狹窄的重要原因。最近研究顯示血管平滑肌細(xì)胞在不同的分化階段有不同的細(xì)胞表型，不同表型之間的平滑肌細(xì)胞生理特性相差巨大，并且在外界因素發(fā)生變化時，VSMCs不同表型之間可以相互轉(zhuǎn)化。正常血管中的VSMCs一般是已分化的“收縮型”平滑肌細(xì)胞，在血管受到損傷時，一些已分化的“收縮型”VSMCs可以去分化成為“分泌型”細(xì)胞。“收縮型”VSMCs低增殖，低分泌，特異性表達(dá)平滑肌肌動蛋白（SMA）、calponin、平滑肌肌動蛋白主要組織相容性復(fù)合體（SM_MHC）等具有標(biāo)志意義的特征性蛋白，“分泌型”VSMCs增殖加快，細(xì)胞外基質(zhì)分泌增加，表達(dá)“收縮型”細(xì)胞所沒有的骨橋蛋白（osteopontin，OPN）?，F(xiàn)在大量的研究結(jié)果顯示在粥樣斑塊中，“收縮型”的VSMCs減少，“分泌型”的VSMCs增多。同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）是目前公認(rèn)的冠狀動脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，我們前期的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)Hcy可以增強(qiáng)VSMCs的增殖和遷移，誘導(dǎo)VSMCs大量分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix Metalloproteinases，MMPs）等影響細(xì)胞外基質(zhì)動態(tài)平衡的蛋白酶。國內(nèi)王生蘭等也通過試驗(yàn)證實(shí)Hcy可以促進(jìn)大鼠血管平滑肌細(xì)胞的增殖和表型轉(zhuǎn)化。過去的研究結(jié)果顯示少量引用低濃度的黃酒可以顯著減少LDLR-/-小鼠主動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊的面積，低濃度的黃酒還可以抑制大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞分泌MMP2。國外的大量研究已經(jīng)證實(shí)紅酒中主要是多酚類物質(zhì)具有AS的作用，所以我們推測黃酒中的多酚類物質(zhì)也具有抗AS的作用。

1材料與方法

11材料：（1）實(shí)驗(yàn)動物：SPF級SD大鼠，雌雄不限，50天左右，體重150g～180g（購自浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心）。（2）實(shí)驗(yàn)試劑：黃酒多酚（上海中藥制藥技術(shù)有限公司，國家中藥制藥工程技術(shù)研究中心），乙醚、甲醇、75%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、甲醇（杭州化學(xué)試劑有限公司）、DMEM高糖培養(yǎng)基、PBS、025%胰蛋白酶_EDTA、青霉素和鏈霉素（杭州吉諾公司）、同型半胱氨酸（Sigma公司）、胎牛血清（GIBCO公司）、MTT（Emresco公司）、DAPI（Rcohe公司）、兔抗大鼠SM_actin單克隆抗體、兔抗Calponin、SM_MHC、OPN多克隆抗體（ABCOM公司）、辣根過氧化酶標(biāo)記的山羊抗兔或者抗鼠二抗、FITC、FRITC標(biāo)記的山羊抗兔IGg（jackson公司）、蛋白免疫印跡以及明膠酶譜相關(guān)試劑（江蘇碧云天生物技術(shù)研究所）。

12VSMC原代細(xì)胞培養(yǎng)以及鑒定：采用組織貼塊法培育大鼠胸主動脈VSMCs，采用形態(tài)學(xué)觀察和細(xì)胞免疫熒光檢測SMA鑒定VSMCs，通過SMA與DAPI核染之間的關(guān)系鑒定VSMCs的純度。取第4～7代細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞加干預(yù)因素時用含25%胎牛血清的培養(yǎng)基。

13分組及干預(yù)：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為5組，分別為空白組（不加任何干預(yù)因素），Hcy組（濃度為100μmol/L，以001%DMSO為溶劑），黃酒多酚組（100μmol/L Hcy+50mg/L黃酒多酚，以001%DMSO為溶劑），酒精組（100μmol/L Hcy+15%酒精），黃酒組（100μmol/L Hcy+黃酒）。國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道DMSO終濃度

14MTT法測VSMCs增殖：取4～7代培養(yǎng)細(xì)胞，025%胰蛋白酶消化單層VSMCs，用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基配成細(xì)胞懸液并計(jì)數(shù)，以每孔6×103個細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中。待細(xì)胞貼壁后，無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時使細(xì)胞同步化。各組細(xì)胞按上述分組加入對應(yīng)濃度的干預(yù)因子，每組設(shè)3個復(fù)孔，2個不加細(xì)胞的空白對照孔。細(xì)胞于37℃、5% CO2孵箱培養(yǎng)24小時、48小時和72小時。培養(yǎng)結(jié)束，每孔加入MTT液20μL，37℃繼續(xù)孵育4～6小時，終止培養(yǎng)，小心棄去培養(yǎng)上清，每孔加入150μL DMSO，震蕩10分鐘，選擇490nm波長于酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔吸光值并記錄。以時間為橫軸，吸光值為縱軸繪制VSMCs生長表。

15細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測VSMCs遷移：取4～7代培養(yǎng)細(xì)胞，025%胰蛋白酶消化單層VSMCs，用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基配成細(xì)胞懸液并計(jì)數(shù)，以每孔105個細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，每孔體積2mL。細(xì)胞鋪滿板底后，無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時使細(xì)胞同步化，加入18mmol/L羥基脲作用12h抑制細(xì)胞增殖，用100μl黃色槍頭垂直于孔板制造細(xì)胞劃痕，吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS沖洗孔板三次，洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。加入各組相應(yīng)的干預(yù)因子，拍照記錄0、12、24、48、72、96小時圖片，用image pro plus60分析計(jì)算出細(xì)胞遷移的面積（劃痕面積減去遷移后細(xì)胞之間剩余面積），細(xì)胞遷移的面積與最開始的劃痕面積之間的比值來表示遷移的多少。

16Transwell法測VSMCs遷移：取4～7代VSMCs，血清饑餓使細(xì)胞同步化，加入18mmol/L羥基脲作用12h抑制細(xì)胞增殖，025%胰蛋白酶消化單層VSMCs，用含有各組干預(yù)因子的DMEM高糖培養(yǎng)基（無血清）配成細(xì)胞懸液并計(jì)數(shù)（3×104個/ml）。各組24孔板配套的Transwell小室（08μm）上室加入200μl細(xì)胞懸液，下室加入含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基500μl，分別培養(yǎng)4小時、8小時、12小時、24小時、48小時。干預(yù)結(jié)束后以棉簽輕輕擦去上層未穿透膜的VSMCs，取下Transwell半透膜，TBS洗滌3次，37%多聚甲醛室溫固定5min，流水沖洗后，用2μg/ml的DAPI染核，PBS沖洗后，熒光顯微鏡下隨機(jī)每組取5個視野計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)并記錄。

17細(xì)胞免疫熒光法檢測各組中SM_actin在細(xì)胞中的分布及表達(dá)：將第4～7代細(xì)胞接種于96孔板，每孔3000～5000個細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁后加入各組干預(yù)因子，在細(xì)胞融合之前進(jìn)行檢測。先PBS洗三遍，用4%多聚甲醛固定，025%Triton X 100穿破細(xì)胞膜，山羊血清室溫封閉1h，加入稀釋了250倍的anti_SMA抗體，4℃過夜，PBST清洗三遍之后加入結(jié)合有FICT或者FRICT的山羊抗兔二抗，室溫孵育一小時后PBST清洗三遍，熒光顯微鏡拍照后圖片用iamge pro plus 60分析。

18Western blot測定VSMCs中SM_actin、calponin、OPN的表達(dá)：各個干預(yù)因子干預(yù)48小時之后，裂解VSMCs提取蛋白，BCA法蛋白定量，SDS_PAGE膠每孔加入20μl樣品，80V 30min進(jìn)行蛋白濃聚，120V 2小時進(jìn)行凝膠電泳，并用孔徑045μm硝酸纖維素膜250mA 90min進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜完畢經(jīng)常溫下TBST洗膜x3、脫脂奶粉封閉2小時后，以1：1000濃度加入兔抗鼠SM_actin一抗（或抗calponin、SM_MHC、OPN、β_actin一抗），4℃孵育過夜，常溫下TBST洗膜x3，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗孵育后ECL化學(xué)發(fā)光法檢測目標(biāo)蛋白和內(nèi)參。暗室柯達(dá)膠片顯影，Quantity one軟件定量分析。

19統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS200統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（x-±s）表示，多組均數(shù)比較用單因素方差分析，組間比較采用LSD法，P

2結(jié)果

21VSMCs原代培養(yǎng)及鑒定：用組織貼塊法培養(yǎng)大鼠胸主動脈VSMCs，大概8天左右組織塊周圍有細(xì)胞爬出，兩周左右細(xì)胞融合可以傳代。傳代后細(xì)胞呈典型“峰谷”狀排列生長，用SM_actin細(xì)胞免疫熒光鑒定VSMCs，DAPI核染之后確定細(xì)胞純度在99%以上，見圖1。圖1大鼠主動脈VSMCs形態(tài)學(xué)（×100）以及細(xì)胞免疫熒光鑒定（×400）22黃酒多酚和黃酒抑制Hcy誘導(dǎo)的VSMCs增殖：在加入各組干預(yù)因素后，12小時和24小時時各組OD值沒有明顯區(qū)別。相比于空白對照組，48小時之后Hcy組OD值明顯升高（P

26Western blot檢測各組細(xì)胞中SM_actin、calponin、SM_MHC、OPN的表達(dá)情況：各組VSMCs中SM_actin的表達(dá)量沒有顯著差異，相比于空白組，Hcy組VSMCs中OPN表達(dá)增加（P

在不同的外界因素影響下，VSMCs具有不同的細(xì)胞表型，具有很強(qiáng)的可塑性。在正常血管中膜中的VSMCs是一種高分化的細(xì)胞，細(xì)胞呈梭形，主要起維持血管形狀和收縮血管的作用，具有低增殖、低遷移、低蛋白分泌等特征；當(dāng)發(fā)生動脈粥樣硬化等血管疾病時，VSMCs可以去分化為未分化的細(xì)胞，形態(tài)變圓，細(xì)胞收縮性能下降，表現(xiàn)出高增殖、高遷移、高蛋白分泌等特征。過去的觀點(diǎn)是將VSMCs細(xì)胞表型單純的分為“收縮型”和“分泌型”兩種表型，現(xiàn)在大量的研究已經(jīng)證實(shí)，在不同強(qiáng)度的外界因素作用下，VSMCs去分化的程度不同，可表現(xiàn)出各種介于“收縮”型與“分泌”型之間的細(xì)胞表型特征，從而在很多血管疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。

自從1979年Chamley等第一次發(fā)現(xiàn)平滑肌細(xì)胞具有不同的細(xì)胞表型以來，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一大批特異性比較高的可以作為已分化成熟VSMCs標(biāo)志的蛋白，比如與細(xì)胞收縮密切相關(guān)的SM_actin、calponin、SM_MHC、SM22α、smoothelin等蛋白以及參與細(xì)胞骨架構(gòu)成的h_caldesmon、β_vinculin、telokin、metavinculin、desmin等蛋白。這些蛋白在分化成熟的VSMCs中表達(dá)，其表達(dá)量隨著平滑肌細(xì)胞的去分化而逐漸減少，相反，最近的研究發(fā)現(xiàn)OPN和糖基質(zhì)蛋白在去分化的VSMCs中開始表達(dá)，并且表達(dá)量跟細(xì)胞的去分化程度呈正相關(guān)。通過檢測SMα_actin、SM_MHC、calponin、OPN等蛋白的表達(dá)情況是近幾年來國內(nèi)外研究者常用的鑒別VSMCs不同細(xì)胞表型的方法。

隨著“法國悖論”以及“地中海飲食”等概念的提出，國內(nèi)外大量的研究都證實(shí)規(guī)律適量的飲用紅酒具有心血管保護(hù)作用并且已經(jīng)闡明紅酒的心血管保護(hù)作用主要是由于其中的多酚類成分。紅酒多酚主要由兒茶素、花青素、白藜蘆醇等組成，通過改善血管功能、調(diào)節(jié)血脂、調(diào)節(jié)特異性Micro RNA、抑制VSMCs增殖和遷移等作用而發(fā)揮心血管保護(hù)作用。紹興黃酒由糯米發(fā)酵而成，也富含兒茶素、沒食子酸等多酚類物質(zhì)，我們前期的動物試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)黃酒多酚具有抑制高脂飲食小鼠AS的作用和抑制Hcy誘導(dǎo)的VSMCs高表達(dá)MMPs等影響細(xì)胞外基質(zhì)平衡的蛋白。在本實(shí)驗(yàn)中，我們進(jìn)一步證明黃酒多酚具有抑制Hcy誘導(dǎo)的VSMCs表型轉(zhuǎn)化的作用，這可能是多酚具有抗動脈粥樣硬化作用的另一機(jī)制。

參考文獻(xiàn)

Owens GK， Kumar MS， Wamhoff BR. Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease[J]. Physiol Rev，2004，84（3）：767-801.

Jiang H， Lun Y， Wu X， et al. Association between the Hypomethylation of Osteopontin and Integrin beta3 Promoters and vascular smooth muscle cell differentiation in Great Saphenous Varicose Veins[J]. Int J Mol Sci，2014，15（10）：18747-18761.

Gomez D， Owens GK. Smooth muscle cell phenotypic switching in atherosclerosis[J]. Cardiovasc Res，2012，95（2）：156-164.

Shi YF， Chi JF， Tang WL， et al. Effects of rosuvastatin on the production and activation of matrix metalloproteinase_2 and migration of cultured rat vascular smooth muscle cells induced by homocysteine[J]. Journal of Zhejiang University_Science B，2013，14（8）：696-704.

王生蘭，劉輝琦，曹學(xué)峰，等.同型半胱氨酸促進(jìn)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖和表型轉(zhuǎn)化[J].中國病理生理雜志，2010，26（7）：1321-1324.

Zhai X， Chi J， Tang W， et al. Yellow wine polyphenolic compounds inhibit matrix metalloproteinase_2， _9 expression and improve atherosclerotic plaque in LDL_receptor_knockout mice[J]. J Pharmacol Sci，2014，125（2）：132-141.

Qin F， Siwik DA， Luptak I， et al. The polyphenols resveratrol and S17834 prevent the structural and functional sequelae of diet_induced metabolic heart disease in mice[J]. Circulation，2012，125（14）：1757-1764.

Martin KA， Rzucidlo EM， Merenick BL， et al. The mTOR/p70 S6K1 pathway regulates vascular smooth muscle cell differentiation[J]. Am J Physiol Cell Physiol，2004，286（3）：C507-517.

Alexander MR， Owens GK. Epigenetic control of smooth muscle cell differentiation and phenotypic switching in vascular development and disease[J]. Annu Rev Physiol，2012，74：13-40.

Wagner RJ， Martin KA， Powell RJ， et al. Lovastatin induces VSMC differentiation through inhibition of Rheb and mTOR[J]. Am J Physiol Cell Physiol，2010，299（1）：C119-127.

方立，陳美芳，余國龍，等.內(nèi)皮祖細(xì)胞對血管緊張素2誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的影響[J].中國動脈硬化雜志，2009，17（6）：459-464.

Li H， Forstermann U. Red wine and cardiovascular health[J]. Circ Res，2012；111（8）：959-961.

篇11

[中圖分類號] R574.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2013）07（a）-0037-03

感染性疾病在兒童疾病譜中仍占首要位置，在胃腸道感染疾病中，EPEC在發(fā)展中國家兒童中的發(fā)病率較高[1-2]，尤其是3歲以下的幼兒，且疾病的危害性大。在兒童胃腸感染性疾病中，近年來有關(guān)輪狀病毒性腹瀉疾病中CD4+T淋巴細(xì)胞亞群及其代表因子的研究較多，細(xì)菌性腹瀉病例散發(fā)、不易收集，國內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于細(xì)菌性腹瀉病例的CD4+ T淋巴細(xì)胞亞群代表因子研究少有報(bào)道。Th1、Th2、Th17淋巴細(xì)胞是CD4+T淋巴細(xì)胞的三個亞群，在感染性疾病和免疫相關(guān)等疾病中發(fā)揮著重要作用。本研究以小鼠細(xì)菌感染性腹瀉為疾病模型，探索小鼠經(jīng)口感染EPEC后外周血漿中的Th1、Th2、Th17淋巴細(xì)胞代表因子水平的變化以了解小鼠的免疫反應(yīng)特點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 普通健康昆明小鼠40只，雌雄各半，體重18～22 g（5～6周齡，購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，檢驗(yàn)檢疫合格），于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心屏障實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將40只昆明小鼠隨機(jī)分成生理鹽水對照組（20只）和實(shí)驗(yàn)組（20只）。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 致病性大腸桿菌（EPEC-E2348/69）（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心惠贈），小鼠T淋巴細(xì)胞因子CBA組合試劑盒（BD美國），血細(xì)胞分析儀（NIHON KOHDEN日本），離心機(jī)（德國KENDRO公司），-80℃冰箱，渦旋混勻器（IKA公司），流式細(xì)胞儀（美國BD公司）。

1.2 感染性腹瀉小鼠模型制備

1.2.1 實(shí)驗(yàn)組 所有小鼠均單籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前禁食24 h、禁水1 h。①實(shí)驗(yàn)開始前對每只小鼠進(jìn)行眼眶靜脈采血，放置于經(jīng)EDTA鉀鹽溶液浸潤過的容器中，留作血細(xì)胞分析。②給每只小鼠灌胃3%碳酸氫鈉溶液0.3 mL。③配制濃度為5×108 cfu/mL的致病性大腸桿菌混懸液，灌胃碳酸氫鈉溶液半小時后，對實(shí)驗(yàn)組每只小鼠灌入細(xì)菌混懸液0.5 mL；4.8 h后更換空鼠籠，不添加墊料，觀察小鼠的大便性狀。

1.2.2 對照組 對照組不作血常規(guī)檢測，處理因素將致病性大腸桿菌混懸液更換為生理鹽水0.5 mL，余處理過程同實(shí)驗(yàn)組。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)中觀察及檢測指標(biāo) ①灌胃8 h后，觀察小鼠的大便性狀、精神狀態(tài)、行動動作。②灌胃后第24小時，對實(shí)驗(yàn)組所有小鼠采血進(jìn)行血細(xì)胞分析。小鼠精神萎靡、少動或激惹躁動，大便性狀為黏液、稀便，血細(xì)胞分析白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)意義則視為造模成功。

1.3 感染性腹瀉小鼠外周血T淋巴細(xì)胞因子檢測

1.3.1 外周血采集及血漿分離 在第24小時對實(shí)驗(yàn)組、對照組小鼠行摘眼球法取血，取部分血行血細(xì)胞分析，余下經(jīng)過離心10 min（3000 r/min，離心半徑16.5 cm），收集血漿，凍存于-80℃冰箱中以備統(tǒng)一檢測。

1.3.2 T淋巴細(xì)胞因子檢測 上述血漿在37℃孵化箱中解凍， 細(xì)胞因子檢測具體步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，經(jīng)過流式細(xì)胞儀上機(jī)處理后可獲得各細(xì)胞因子的熒光強(qiáng)度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成相應(yīng)濃度（自動換算），結(jié)果以ng/L表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，非正態(tài)分布及未知分布形態(tài)總體采用秩和檢驗(yàn)Wilcoxon W檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以M（P25，P75）中位數(shù)、四分位間距表示。以P < 0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 感染性腹瀉小鼠模型的建立

細(xì)菌灌胃后約6 h小鼠出現(xiàn)倦怠、精神萎靡、行動遲緩，部分小鼠出現(xiàn)黏液便、稀便，部分小鼠出現(xiàn)松軟大便（較正常糞便含水多）。灌胃前后分別取小鼠血液進(jìn)行血細(xì)胞分析，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組小鼠灌胃前后白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），中性粒細(xì)胞百分比（N%）、淋巴細(xì)胞百分比（L%）雖有改變，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.076 > 0.05，P = 0.086 > 0.05）。見表1。

2.2 血漿中Th1、Th2、Th17淋巴細(xì)胞因子水平檢測

實(shí)驗(yàn)組小鼠在胃腸感染后外周血漿中淋巴細(xì)胞因子：IL-2、IL-6、IL-10、IL-4、IL-17A較對照組水平升高，與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P < 0.05）。TNF、IFN-γ兩細(xì)胞因子水平與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

3 討論

有關(guān)動物細(xì)菌性腹瀉模型的報(bào)道較少，主要是大腸桿菌誘導(dǎo)動物腹瀉模型，且多為經(jīng)腹腔注射誘導(dǎo)動物腹瀉，但此類方式與傳統(tǒng)的人類經(jīng)口感染方式不同。本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)口灌喂細(xì)菌感染小鼠，與傳統(tǒng)的運(yùn)用中草藥及腹腔注射制作小鼠腹瀉模型原理不同，模仿人類胃腸感染主要誘發(fā)途徑（經(jīng)口感染）。通過主觀的觀察指標(biāo)（大便性狀、行動動作）和客觀實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（血細(xì)胞分析結(jié)果）分析判定小鼠感染，更能模擬人類腸道感染時狀態(tài)。本次實(shí)驗(yàn)開始前采取禁食水以及灌胃碳酸氫鈉溶液，目的是為了減少腸內(nèi)容物及營養(yǎng)物、減少胃酸分泌 ，降低胃腸的屏障功能使得細(xì)菌得以存活繼而繁殖、黏附，造成腸道組織損傷及其免疫反應(yīng)以達(dá)到腹瀉的效果。人類細(xì)菌感染一般情況下白細(xì)胞計(jì)數(shù)是升高的，但實(shí)驗(yàn)過程中小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)表現(xiàn)為降低（重復(fù)兩次），或許是重度感染所致，中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞百分比變化符合人類細(xì)菌感染時情況但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具體有待進(jìn)一步研究（但考慮為唯一處理因素，且處理后有統(tǒng)計(jì)意義，處理有效）。

細(xì)菌腸道感染后，鼠模型的腸黏膜完整性及上皮細(xì)胞受損、細(xì)菌毒素侵入及局部體液分泌使小鼠出現(xiàn)黏液稀便、精神萎靡等炎性反應(yīng)的表現(xiàn)，血細(xì)胞的組成比例也發(fā)生變化。腸道黏膜免疫系統(tǒng)和全身的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生應(yīng)答，有多個細(xì)胞因子參與，其中包括Th1類淋巴細(xì)胞代表因子：IL-2、TNF、IFN-γ，Th2類淋巴細(xì)胞代表因子：IL-6、IL-10、IL-4，Th17類淋巴細(xì)胞代表因子：IL-17A，它們在適應(yīng)性免疫應(yīng)答過程中起著重要作用。

有研究指出兒童感染性腹瀉病發(fā)病時體內(nèi)IL-6水平升高[3-4]，包括細(xì)菌性和病毒性腹瀉，本實(shí)驗(yàn)小鼠在細(xì)菌感染后血液中IL-6水平也呈升高趨勢。IL-6是多功能炎癥細(xì)胞因子，升高后可促進(jìn)B細(xì)胞增殖分化和分泌抗體，促進(jìn)抗體與抗原（病原）結(jié)合進(jìn)而清除病原。

IL-2在T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答中起到促進(jìn)、維持T細(xì)胞活化增殖的重要作用，促進(jìn)所有亞型T淋巴細(xì)胞活化增殖及產(chǎn)生細(xì)胞因子。IL-4促使活化的B淋巴細(xì)胞分泌IgE和IgG1，促進(jìn)IgG向IgE類型轉(zhuǎn)換，以自分泌方式促進(jìn)Th2細(xì)胞分化但抑制Th1細(xì)胞增殖及其應(yīng)答等，在變態(tài)反應(yīng)疾病發(fā)病過程中有重要作用。關(guān)于IL-2、IL-4這兩個因子在感染性腹瀉?。ㄓ绕涫羌?xì)菌性）中少有報(bào)道，在一項(xiàng)旅行者腹瀉研究中[5]諾瓦克病毒感染組IL-2、IFN-γ升高，主要由Th1細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)，諾瓦克病毒和產(chǎn)毒性大腸桿菌混合組呈現(xiàn)Th1/Th2雙重免疫反應(yīng)。本研究提示IL-2、IL-4都高于正常對照組，IL-2在疾病過程中促進(jìn)了各亞型T細(xì)胞活化，促進(jìn)炎癥的發(fā)展，IL-4的升高一定程度上抑制了Th1介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，同時也促進(jìn)了Th2介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。

IL-10是一類重要的抑制性細(xì)胞因子，抑制IL-2、IFN-γ等促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生，抑制Th1細(xì)胞應(yīng)答。IL-10作為抗炎介質(zhì)對膿毒癥有一定保護(hù)作用，F(xiàn)lorquin等[6-7]報(bào)道BALB/C小鼠經(jīng)注射葡萄球菌腸毒素（SEB）4 h后血液中IL-10水平明顯高于對照組，IL-10單抗可將SEB攻擊小鼠的死亡率提高30%，該作用可被IFN-γ抗體抑制，IL-10是黏膜免疫應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子。本實(shí)驗(yàn)提示EPEC腸道感染小鼠血中IL-10水平升高，與上述研究結(jié)果類似，對炎癥的放大和擴(kuò)散起到限制作用，避免了炎性連鎖反應(yīng)及無限擴(kuò)大，具有抑制全身炎性反應(yīng)綜合征、膿毒癥的發(fā)生發(fā)展的作用。

IL-17A主要由Th17淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，是重要的促炎因子，誘導(dǎo)炎癥因子和趨化因子釋放，如IL-6、IL-8等，募集、活化中性粒細(xì)胞并抑制其凋亡。在兒童感染性腹瀉病研究中[8-9]，IL-17A參與疾病的免疫反應(yīng)，且在遷延性感染中IL-17A水平高于急性期組和正常對照組。本次實(shí)驗(yàn)小鼠急性期出現(xiàn)感染性腹瀉后IL-17A水平與對照組相比升高且有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與報(bào)道不完全相同。IL-17A在急性期促進(jìn)炎癥反應(yīng)，使機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，但若長期高于正常水平存在將導(dǎo)致機(jī)體的慢性炎癥或相關(guān)免疫性疾病發(fā)生。動物實(shí)驗(yàn)顯示[10]，Th17細(xì)胞在腸道慢性炎癥的維持中發(fā)揮重要作用，中和IL-17A后模型小鼠腸道炎癥明顯減輕。

本研究顯示EPEC腸道感染模型中外周血TNF、IFN-γ水平均有不同程度升高，但與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。IL-2、IL-6、IL-17、TNF、IFN-γ為促炎因子，IL-4、IL-10為抗炎因子，但多個因子同時具有抗炎和促炎兩種作用。本研究顯示在出現(xiàn)胃腸道感染后，小鼠體內(nèi)炎性反應(yīng)并非單純的促炎或抗炎細(xì)胞因子水平升高，也不是表現(xiàn)為單純Th1類細(xì)胞因子或單純Th2類細(xì)胞因子水平升高，呈現(xiàn)Th1/Th2混合免疫狀態(tài)。雖然Th1細(xì)胞因子有一定程度升高，但I(xiàn)L-4以及IL-6、IL-10的明顯升高表明在急性期以Th2細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答占優(yōu)勢，Th1/Th2下降，失衡的Th1/Th2是否能恢復(fù)、何時恢復(fù)、如何恢復(fù)有待進(jìn)一步研究。如果調(diào)高的Th2、Th17細(xì)胞因子水平持續(xù)存在，那么推測EPEC腸道感染存在誘導(dǎo)慢性免疫性疾病的可能。

促炎因子反應(yīng)過強(qiáng)則造成機(jī)體組織損傷加重，抗炎因子反應(yīng)過強(qiáng)則對機(jī)體抗病原體免疫反應(yīng)產(chǎn)生一定程度抑制效應(yīng)，這種抑制效應(yīng)在一定程度上能夠減少或避免組織更大的損傷，但同時可造成慢性遷延性感染及相關(guān)免疫疾病的發(fā)生。促炎反應(yīng)、抗炎反應(yīng)、Th1/Th2細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)是一個動態(tài)平衡過程，一旦失衡將導(dǎo)致相關(guān)疾病的產(chǎn)生如慢性炎癥或免疫相關(guān)疾病。多種免疫相關(guān)性疾病與感染相關(guān)，可由感染直接或間接誘發(fā)，本研究表明EPEC腸道感染小鼠模型體內(nèi)Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)性淋巴因子增高為主，Th1/Th2降低，提示腸道細(xì)菌感染可能與某些病原體呼吸道感染[11]（合胞病毒等）一樣，有增加變應(yīng)性疾病發(fā)生的傾向。有關(guān)于非致病性大腸桿菌（Nonpathogenic E. coli ATCC 25922）抑制小鼠氣道過敏疾病動物模型體內(nèi)的特異性IgE、IL-4的水平的報(bào)道，且呈時間和劑量依賴性[12]，但本研究使用的是致病性大腸桿菌和健康小鼠，結(jié)果和研究方式有所不同。鑒于Th2、Th17細(xì)胞在變態(tài)反應(yīng)性疾病發(fā)病機(jī)制中的重要作用，兒童感染性腹瀉?。?xì)菌感染）與變態(tài)反應(yīng)疾病是否有一定相關(guān)性尚需進(jìn)一步深入研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Chandra BK，Singh G，Taneja N，et al. Diarrhoeagenic Escherichia colias a predominant cause of paediatric nosocomial diarrhoea in India[J]. J Med Microbiol，2012，61（Pt 6）：830-836.

[2] Alikhani MY，Sedighi I，Zamani A，et al. Incidence of diarrhoeagenic Escherichia coli isolated from young children with diarrhoeain the west of Iran [J]. Acta Microbiol Immunol Hung，2012，59（3）：367-374.

[3] 楊立華，傅小鳳，潘傳四，等.細(xì)胞炎前因子測定對感染性腹瀉診斷的價值[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2007，22（1）：15-16.

[4] 熊文虹，杜華，李柳青.急性感染性腹瀉患兒血清細(xì)胞因子測定的臨床意義[J].臨床兒科雜志，2002，20（7）：439.

[5] Ko G，Jiang ZD，Okhuysen PC，et al. Fecal cytokines and markers of intestinal inflammation in international travelers with diarrhea due to Noroviruses [J]. J Med Virol， 2006，78（6）：825-828.

[6] Florquin S，Amraoui Z，Goldman M. Persistent production of TH2-type cytokines and polyclonal B cell activation after chronic administration of staphylococcal enterotoxin B in mice[J]. J Autoimmun，1996，9（5）：609-615.

[7] Rennic DM，F(xiàn)ort MM. Lessons fromgenetically engineered animal models. XⅡ IL-10-deficient（IL-10（-/-）mice and intestinal inflammation [J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2000，278（6）：G829-833.

[8] 牛文元，張鎂硒，趙青，等.感染性腹瀉病和潰瘍性結(jié)腸炎患兒血清IL-17的水平變化及意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2010，48（5）：58-59.

[9] 劉紅.人白細(xì)胞介素17在感染性腹瀉患兒血清中的表達(dá)水平及臨床意義[J].中國實(shí)用醫(yī)刊，2011，38（2）：92-93.

[10] Yen D，Cheung J，Scheerens H，et al. IL-23 is essential for T cell-mediated colitis and promotes inflammation via IL-17 and IL-6 [J]. J Clin Invest，2006，116（5）：1310-1316.